產(chǎn)品介紹:
豬瘟野毒株/非洲豬瘟病毒(CSFV-W/ASFV)核酸檢測(cè)試劑盒(雙重?zé)晒釶CR法)是一種基于雙重實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Duplex qPCR)技術(shù)的獸醫(yī)分子診斷產(chǎn)品。該試劑盒專門用于體外定性檢測(cè)豬的臨床樣本中是否存在豬瘟病毒野毒株(Classical Swine Fever Virus-Wild strain, CSFV-W)和非洲豬瘟病毒(African Swine Fever Virus, ASFV)的特異性核酸。
產(chǎn)品名稱 | 豬瘟野毒株/非洲豬瘟病毒(CSFV-W/ASFV)核酸檢測(cè)試劑盒(雙重?zé)晒釶CR法) | 貨號(hào) | AP4018 |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR | 規(guī)格 | 50T |
豬瘟(CSF)和非洲豬瘟(ASF)均為世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(WOAH)規(guī)定的A類傳染病,也是我國(guó)生豬養(yǎng)殖業(yè)中危害最嚴(yán)重的兩種病毒性疫病。該試劑盒通過在一個(gè)反應(yīng)體系中同時(shí)檢測(cè)這兩種高致死率病原體,并能區(qū)分豬瘟野毒感染與疫苗免疫(通過配套的鑒別試劑盒或特定設(shè)計(jì)),為疫情的早期快速鑒別、緊急處置及防控凈化提供了精準(zhǔn)、高效的工具。
檢測(cè)原理:雙重?zé)晒舛縋CR
該試劑盒的核心原理是利用TaqMan探針法,針對(duì)兩種病毒的特異性基因序列進(jìn)行同步擴(kuò)增和檢測(cè):
靶標(biāo)基因選擇:
豬瘟病毒野毒株 (CSFV-W):針對(duì)豬瘟病毒基因組的高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,通常位于5'-UTR非編碼區(qū)或E2囊膜糖蛋白基因。為了區(qū)分野毒感染與豬瘟兔化弱毒疫苗(HCLV)免疫,部分鑒別試劑盒會(huì)針對(duì)疫苗株的特異性標(biāo)記(如缺失序列)設(shè)計(jì)探針,但本通用型試劑盒主要檢測(cè)所有CSFV野毒株。
非洲豬瘟病毒 (ASFV):針對(duì)非洲豬瘟病毒的高度保守基因設(shè)計(jì)特異性引物和探針,通常位于p72基因(B646L,衣殼蛋白基因)、p30基因(CP204L)或MGF基因區(qū)域。p72基因是目前OIE推薦和行業(yè)內(nèi)最常用的檢測(cè)靶標(biāo)。
雙重檢測(cè)機(jī)制:
FAM通道:通常用于檢測(cè)非洲豬瘟病毒(ASFV)。若樣本中含有ASFV,F(xiàn)AM熒光信號(hào)會(huì)隨PCR擴(kuò)增而增強(qiáng)。
HEX/VIC/Cy5通道:通常用于檢測(cè)豬瘟病毒野毒株(CSFV-W)。若樣本中含有CSFV,該通道熒光信號(hào)會(huì)隨PCR擴(kuò)增而增強(qiáng)。
結(jié)果判定:通過分析兩個(gè)通道的擴(kuò)增曲線和Ct值,可以判斷樣本中是單一感染(僅CSFV或僅ASFV)還是混合感染(CSFV和ASFV同時(shí)存在)。
內(nèi)標(biāo)系統(tǒng):部分試劑盒會(huì)引入內(nèi)源性內(nèi)標(biāo)(如豬源性內(nèi)參基因,標(biāo)記為ROX),用于監(jiān)控樣本采集質(zhì)量、核酸提取效率及PCR反應(yīng)體系是否存在抑制物,防止假陰性。
核心組分與性能參數(shù)
PCR反應(yīng)預(yù)混液:包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、Mg2?緩沖液、UNG酶(防污染)及兩組特異性引物探針混合物。
陰陽(yáng)性對(duì)照:
陽(yáng)性對(duì)照:含有CSFV和ASFV目標(biāo)片段的質(zhì)粒混合物或滅活病毒液(PTC)。
陰性對(duì)照:無核酸酶的水(NTC)。
陽(yáng)性對(duì)照:含有CSFV和ASFV目標(biāo)片段的質(zhì)?;旌衔锘驕缁畈《疽海≒TC)。
關(guān)鍵性能參數(shù):
最低檢測(cè)限 (LOD):通??蛇_(dá) 1×103 copies/mL。
檢測(cè)范圍:通常為 2×103 ~ 1×10? copies/mL。
特異性:與其他豬常見病原體(如豬繁殖與呼吸綜合征病毒、豬圓環(huán)病毒等)無交叉反應(yīng)。
檢測(cè)時(shí)間:從核酸提取到出結(jié)果通常僅需 2-3 小時(shí)。
規(guī)格:常見規(guī)格為 50T/盒。
臨床應(yīng)用與意義
高熱綜合征的快速鑒別:當(dāng)豬群出現(xiàn)高熱、皮膚發(fā)紺、出血性病變等臨床癥狀時(shí),快速鑒別是豬瘟野毒感染、非洲豬瘟感染還是混合感染,為臨床處置提供依據(jù)。
混合感染的檢測(cè):在臨床上,豬瘟和非洲豬瘟可能存在混合感染,該試劑盒能同時(shí)檢出兩種病毒,避免漏診。
進(jìn)出口檢驗(yàn)檢疫:作為國(guó)際貿(mào)易中豬病檢測(cè)的依據(jù),符合WOAH的檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。
疫病凈化與監(jiān)測(cè):用于種豬場(chǎng)的定期監(jiān)測(cè),評(píng)估豬群健康狀況。
優(yōu)勢(shì)與局限性
特性 描述
一管雙檢 同時(shí)檢測(cè)豬瘟野毒和非洲豬瘟,節(jié)省樣本、試劑和檢測(cè)時(shí)間,降低檢測(cè)成本。
高靈敏度 可檢測(cè)出極低含量的病毒核酸,優(yōu)于傳統(tǒng)的病毒分離培養(yǎng)法。
高特異性 引物探針針對(duì)特異基因設(shè)計(jì),不易與其他豬病病原體交叉反應(yīng)。
快速高效 相比病毒分離(需數(shù)天),qPCR檢測(cè)僅需數(shù)小時(shí),適合大規(guī)模篩查。
局限性 檢測(cè)結(jié)果受樣本采集質(zhì)量(如抗凝血是否溶血)及核酸提取效率影響大;高度降解的樣本可能導(dǎo)致假陰性。
操作與解讀注意事項(xiàng)
樣本采集:
豬瘟病毒:建議采集抗凝全血(EDTA抗凝)、脾臟、淋巴結(jié)或扁桃體組織。
非洲豬瘟病毒:建議采集抗凝全血(EDTA抗凝)、血清、脾臟、淋巴結(jié)或肌肉組織。
核酸提取:需使用專門的病毒DNA/RNA提取試劑盒(ASFV為DNA病毒,CSFV為RNA病毒,部分試劑盒需提取總核酸),避免抑制物殘留。
防污染:PCR實(shí)驗(yàn)室必須嚴(yán)格分區(qū),使用帶濾芯的吸頭,防止擴(kuò)增產(chǎn)物氣溶膠污染導(dǎo)致假陽(yáng)性。
結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn):
陽(yáng)性:FAM或HEX/VIC通道Ct值 ≤ 35-38(參照說明書),且擴(kuò)增曲線呈典型的“S”型指數(shù)增長(zhǎng)。
陰性:FAM和HEX/VIC通道均無擴(kuò)增曲線,或Ct值 > 38-。
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應(yīng)用場(chǎng)景與產(chǎn)品選擇建議
科研領(lǐng)域:
常規(guī)PCR試劑盒。
臨床診斷:
探針法qPCR試劑盒(如牛白血病病毒,靈敏度100拷貝/反應(yīng))。
現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè):
恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒(如LAMP法,90分鐘出結(jié)果)
關(guān)鍵字: 豬瘟野毒株/非洲豬瘟病毒;CSFV-W/ASFV ;核酸檢測(cè)試劑盒; 雙重?zé)晒釶CR法;
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