產(chǎn)品介紹:
該試劑盒采用雙重TaqMan熒光探針技術(shù),可同步特異性檢測(cè)樣本中肉毒桿菌A型(BoNT/A)和B型(BoNT/B)的核酸,具有高靈敏度(最低檢測(cè)限1×103 copies/mL)、高特異性(≥99%)和快速檢測(cè)(2-3小時(shí))的特點(diǎn),適用于食品安全檢測(cè)、臨床疑似病例診斷及生物安全監(jiān)測(cè),但需注意其結(jié)果需結(jié)合臨床癥狀綜合判斷且對(duì)樣本質(zhì)量要求高。
產(chǎn)品名稱 | 肉毒桿菌A/B型(CB-A/B)核酸檢測(cè)試劑盒(雙重?zé)晒釶CR法) | 貨號(hào) | AP4035 |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR | 規(guī)格 | 50T |
一、核心作用與檢測(cè)原理
該試劑盒主要用于同步檢測(cè)食品、環(huán)境及臨床樣本(如糞便、血液、組織)中的肉毒桿菌A/B型核酸,其核心原理基于:
雙重靶標(biāo)設(shè)計(jì):FAM通道靶向BoNT/A基因保守區(qū),HEX/VIC通道靶向BoNT/B基因保守區(qū),實(shí)現(xiàn)單管同步檢測(cè)
熒光檢測(cè)機(jī)制:PCR擴(kuò)增過(guò)程中,特異性探針?biāo)忉尫艧晒庑盘?hào)(FAM標(biāo)記A型,HEX/VIC標(biāo)記B型),儀器實(shí)時(shí)采集信號(hào)生成擴(kuò)增曲線
內(nèi)參系統(tǒng):部分試劑盒含內(nèi)源性對(duì)照(如18S rRNA)或外源添加對(duì)照,監(jiān)控提取和擴(kuò)增過(guò)程,避免假陰性結(jié)果67
二、產(chǎn)品性能與規(guī)格參數(shù)
性能指標(biāo) 參數(shù)說(shuō)明
檢測(cè)方法 雙重TaqMan熒光定量PCR
規(guī)格 48T/50T/盒(不同品牌規(guī)格略有差異)
保存條件 -20℃避光保存,避免反復(fù)凍融(<5次)
有效期 6-12個(gè)月(不同品牌存在差異)
適用儀器 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche LightCycler等雙通道及以上熒光定量PCR儀
檢測(cè)范圍 2×103~1×10? copies/mL
最低檢測(cè)限 1×103 copies/mL(部分產(chǎn)品可達(dá)100-500拷貝/mL)
檢測(cè)時(shí)效 2-3小時(shí)(含核酸提?。?/span>
特異性 ≥99%,不與水貂、狐貍等其他物種發(fā)生交叉反應(yīng)
檢測(cè)時(shí)效 2-3小時(shí)(含核酸提?。?/span>
三、操作流程與結(jié)果判讀
核心操作步驟
樣本處理:
組織樣品:稱取約0.5g樣品,加入1.5mL生理鹽水研磨,8000rpm離心2min,取上清液100μL進(jìn)行提取
糞便樣品:挑取米粒大小糞便,加入0.5mL生理鹽水,13000rpm離心2min,棄上清,沉淀中加入100μL DNA提取液
血液樣品:取抗凝血下層血細(xì)胞50μL,加入100μL雙蒸水吹勻
DNA提?。?/span>
加入50μL核酸提取液,100℃處理10min,13000rpm離心5min,取上清液-20℃保存
或使用DNA提取試劑盒(離心柱提取法)
PCR擴(kuò)增:
試劑配制:每管加入20μL BL-A/B-qPCR MIX和1μL Taq酶系
加樣:向每管中加入4μL處理后樣品或質(zhì)控品
擴(kuò)增程序:94℃ 2分鐘;94℃ 30秒 → 55℃ 45秒,40個(gè)循環(huán)
熒光通道選擇:FAM通道(BoNT/A)和HEX/VIC/JOE通道(BoNT/B)
結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)
陽(yáng)性:Ct值≤35,擴(kuò)增曲線呈明顯指數(shù)增長(zhǎng)("S"型)
灰區(qū):35<Ct值≤40,建議重復(fù)檢測(cè)確認(rèn)
陰性:Ct值>40或無(wú)Ct值
實(shí)驗(yàn)有效性:
陰性質(zhì)控品:FAM和HEX/VIC/JOE通道全部陰性
陽(yáng)性質(zhì)控品:FAM和HEX/VIC/JOE通道的Ct值均應(yīng)小于30.0
四、應(yīng)用場(chǎng)景與核心優(yōu)勢(shì)
主要應(yīng)用場(chǎng)景
食品安全檢測(cè):用于罐頭、發(fā)酵食品等可能被肉毒桿菌污染的食品檢測(cè)
臨床診斷:對(duì)疑似肉毒中毒患者(如出現(xiàn)眼瞼下垂、吞咽困難、呼吸衰竭等癥狀)進(jìn)行病原學(xué)診斷
生物安全監(jiān)測(cè):用于生物反恐和公共衛(wèi)生安全監(jiān)測(cè)
Veterinary diagnostics :用于動(dòng)物肉毒中毒的診斷
核心優(yōu)勢(shì)
雙重檢測(cè)機(jī)制:?jiǎn)喂芊磻?yīng)同時(shí)檢測(cè)A/B兩種型別,提高檢測(cè)效率,避免單一靶標(biāo)檢測(cè)的假陰性
高靈敏度:可檢測(cè)低至1×103 copies/mL的核酸,顯著優(yōu)于傳統(tǒng)培養(yǎng)法(需10?-10? CFU/mL)
特異性強(qiáng):針對(duì)BoNT/A和BoNT/B基因的特異性保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物,與其他梭菌無(wú)交叉反應(yīng)
操作便捷性:部分試劑盒采用一體化設(shè)計(jì),減少人工操作步驟,支持自動(dòng)化批量處理
五、局限性與關(guān)鍵注意事項(xiàng)
無(wú)法區(qū)分活菌:PCR檢測(cè)不能區(qū)分活菌與死菌,陽(yáng)性結(jié)果需結(jié)合臨床癥狀和培養(yǎng)結(jié)果綜合判斷
樣本質(zhì)量依賴:樣本采集、運(yùn)輸和保存不當(dāng)會(huì)導(dǎo)致DNA降解,影響檢測(cè)結(jié)果,需-80℃保存
基因變異影響:肉毒桿菌毒素基因可能發(fā)生突變,導(dǎo)致引物結(jié)合位點(diǎn)改變,產(chǎn)生假陰性
抑制物干擾:食品基質(zhì)中的PCR抑制物(如多糖、蛋白質(zhì))可能影響擴(kuò)增效率,需使用內(nèi)參系統(tǒng)監(jiān)控
疫苗干擾:若使用了相關(guān)疫苗,免疫后一段時(shí)間內(nèi)可能檢出陽(yáng)性,需結(jié)合免疫史解讀結(jié)果
公司正在出售的產(chǎn)品:
蝶呤甲醇胺脫水酶1抗體 | ZNF71 鋅指蛋白71抗體 |
凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相關(guān)抗原抗體 | 胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白6抗體 |
Kv1.8 電壓門(mén)控鉀通道Kv1.8抗體 | phospho-hnRNP K (Ser284) 磷酸化異質(zhì)核糖核蛋白K抗體 |
生長(zhǎng)抑素受體1抗體 | 超微量ATP酶測(cè)試盒測(cè)Ca2+-ATP酶測(cè)紅細(xì)胞 50管/25樣 100管/50樣 比色法 |
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應(yīng)用場(chǎng)景與產(chǎn)品選擇建議
科研領(lǐng)域:
常規(guī)PCR試劑盒。
臨床診斷:
探針?lè)╭PCR試劑盒(如牛白血病病毒,靈敏度100拷貝/反應(yīng))。
現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè):
恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒(如LAMP法,90分鐘出結(jié)果)
關(guān)鍵字: 肉毒桿菌A/B型 ;CB-A/B ;核酸檢測(cè)試劑盒;雙重?zé)晒釶CR法;
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