商品屬性

測定意義與原理

測定意義

葡萄糖氧化酶（GOD，EC1.1.3.4）是一種需氧脫氫酶，廣泛存在于動植物和微生物中，具有重要的生理和應用價值：臨床診斷：用于檢測血糖水平，輔助診斷糖尿病及相關并發(fā)癥食品工業(yè)：用于葡萄糖檢測、食品保鮮、葡萄糖去除等生物傳感器：構(gòu)建葡萄糖生物傳感器，實現(xiàn)血糖的實時監(jiān)測抗氧化研究：GOD催化葡萄糖氧化產(chǎn)生的H?O?可用于抗氧化活性評價

測定原理（分光光度法）

采用雙酶耦聯(lián)法，GOD催化葡萄糖氧化生成葡萄糖酸和H?O?，過氧化物酶（POD）催化H?O?與4-氨基安替比林（4-AAP）和苯酚反應生成紅色醌類化合物，在505nm處有最大吸收峰，吸光度與GOD活性成正比。反應式如下： 葡萄糖+O2+H2O→GOD葡萄糖酸+H2O2葡萄糖+O2+H2OGOD葡萄糖酸+H2O2 H2O2+4-AAP+苯酚→POD紅色醌類化合物+H2OH2O2+4-AAP+苯酚POD紅色醌類化合物+H2O

試劑盒組成

分光光度法試劑盒

組分 規(guī)格 作用說明

試劑一 液體25mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸緩沖液，pH7.0，用于反應體系構(gòu)建

試劑二 液體10mL×1瓶 含100mmol/L葡萄糖溶液，反應底物

試劑三 液體10mL×1瓶 含20U/mL過氧化物酶（POD），耦聯(lián)酶

試劑四 液體10mL×1瓶 含20mmol/L 4-AAP + 100mmol/L苯酚溶液，顯色劑

標準品 凍干品×1支 含100U GOD標準品，用于建立標準曲線

提取液 液體100mL×1瓶 含0.1mol/L磷酸緩沖液，pH7.4，用于樣本提取

ELISA法試劑盒

組分 規(guī)格 作用說明

微孔酶標板 12孔×8條 預包被抗GOD抗體

標準品 凍干品×1支 GOD標準品，濃度梯度0、5、25、125、625、3125U/L

檢測抗體-HRP 10mL×1瓶 辣根過氧化物酶標記的抗GOD抗體

樣本稀釋液 20mL×1瓶 用于樣本稀釋和標準品復溶

洗滌緩沖液 25mL×1瓶 20×濃縮液，用于洗滌酶標板

底物A/B液 6mL×2瓶 TMB顯色液，用于HRP催化顯色反應

終止液 6mL×1瓶 2M硫酸溶液，終止顯色反應

自備儀器與試劑

必備儀器

分光光度法：可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式高速離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿

ELISA法：酶標儀（450nm/630nm）、洗板機、恒溫培養(yǎng)箱、單道/多道移液器

通用：-20℃冰箱、電子天平、漩渦混勻器

必備耗材

分光光度法：離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器

ELISA法：一次性吸頭、封板膜、96孔板架

自備試劑：蒸餾水/去離子水、生理鹽水、抗凝劑（肝素/EDTA）

樣本前處理方法

動植物組織樣本取新鮮組織，用生理鹽水沖洗干凈，濾紙吸干水分按質(zhì)量(g):提取液(mL)=1:5~10比例（建議0.1g組織加1mL提取液）冰浴勻漿8000g 4℃離心15min，取上清置冰上待測若GOD活性過高，可用提取液稀釋1-5倍測定

細胞/細菌樣本收集對數(shù)生長期細胞/細菌，8000g 4℃離心5min棄上清按細胞數(shù)(10?):提取液(mL)=500~1000:1比例加入提取液，冰浴超聲破碎8000g 4℃離心15min，取上清置冰上待測

液體樣本（血清/血漿/尿液/唾液/食品樣本等）血清樣本：血液凝固后3000g 4℃離心10min，取上清直接測定血漿樣本：加入肝素/EDTA抗凝后，3000g 4℃離心10min，取上清直接測定尿液/唾液：新鮮樣本3000g 4℃離心10min，取上清直接測定或用生理鹽水稀釋食品樣本：固體食品需研磨后用提取液提取，液體食品直接測定

測定操作步驟

分光光度法操作

試劑準備：

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃）

配制工作液：取試劑一5mL + 試劑三0.5mL + 試劑四0.5mL，充分混勻

標準品復溶：將GOD標準品加入1mL蒸餾水復溶，得到100U/mL標準液

標準曲線建立：

稀釋標準品至0、1、5、10、20、50U/mL

取比色皿，加入100μL標準品 + 900μL工作液，混勻后加入100μL試劑二

37℃水浴15min，505nm波長下測定吸光度

繪制標準曲線：y=0.005x+0.001（y為吸光度，x為GOD濃度）

樣本測定：

分光光度計預熱30min，505nm波長，蒸餾水調(diào)零

測定管：取1mL比色皿，加入100μL樣本 + 900μL工作液，混勻后加入100μL試劑二

空白管：取1mL比色皿，加入100μL提取液 + 900μL工作液，混勻后加入100μL試劑二

37℃水浴15min，測定吸光度（A樣、A空）

ELISA法操作

試劑準備：

將試劑盒平衡至室溫（20-25℃）

配制洗滌液：20×濃縮液加蒸餾水稀釋至1×工作液

加樣：

空白孔加100μL樣本稀釋液，標準品/樣本孔加100μL標準品/樣本

封板膜封板，37℃溫育30min

孵育與顯色：

棄孔內(nèi)液體，洗滌3次，拍干后加入100μL檢測抗體-HRP

37℃溫育30min，洗滌5次，拍干后加入底物A、B液各50μL

避光37℃顯色15min，加入50μL終止液終止反應

讀數(shù)：

酶標儀450nm波長，以空白孔調(diào)零，測定各孔吸光度（OD值）

酶活力計算方法

單位定義

U/g鮮重：每克組織鮮重每分鐘催化1μmol葡萄糖氧化的酶量

U/mL：每毫升樣本每分鐘催化1μmol葡萄糖氧化的酶量

U/mgprot：每毫克蛋白每分鐘催化1μmol葡萄糖氧化的酶量

分光光度法計算公式

GOD活性(U/g鮮重)=(A樣?A空)?0.0010.005×V總W×V樣GOD活性(U/g鮮重)=0.005(A樣?A空)?0.001×W×V樣V總

A樣-A空：樣本扣除空白后的吸光度值

V總：反應體系總體積（1.1mL）

W：組織鮮重（g）

V樣：樣本加入體積（0.1mL）

簡化公式

按鮮重計算：GOD（U/g鮮重）= 200×(A樣-A空)÷W

按液體體積計算：GOD（U/mL）= 200×(A樣-A空)

按蛋白含量計算：GOD（U/mgprot）= 200×(A樣-A空)÷Cpr

ELISA法計算根據(jù)標準品OD值繪制標準曲線，擬合回歸方程根據(jù)樣本OD值，從標準曲線查得GOD濃度（U/L）若樣本已稀釋，需乘以稀釋倍數(shù)得到實際濃度

性能指標

指標 分光光度法要求 ELISA法要求

線性范圍 0~50U/mL，R2≥0.995 0~3125U/L，R2≥0.99

檢測下限 ≤0.5U/mL ≤2U/L

批內(nèi)精密度 CV≤5.0% CV≤8.0%

批間精密度 CV≤8.0% CV≤10.0%

回收率 90%~110% 95%~105%

注意事項

樣本處理：

樣本需新鮮制備，避免GOD失活；-80℃可保存1個月

勻漿與超聲破碎需在冰浴中進行，控制溫度在0-4℃

樣本需避免污染，防止雜酶干擾檢測結(jié)果

試劑使用：

葡萄糖溶液需現(xiàn)配現(xiàn)用，避免微生物污染

ELISA試劑避免反復凍融，稀釋后試劑需在1周內(nèi)用完

不同批號試劑不能混用，需重新繪制標準曲線

測定過程：

反應溫度需嚴格控制在37℃，溫度影響酶活性

ELISA加樣需準確，避免交叉污染；溫育時間需嚴格控制

若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測定

質(zhì)量控制：

每次實驗需設置空白對照和質(zhì)控樣本

定期校準儀器，確保檢測結(jié)果準確性

若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確

公司正在出售的產(chǎn)品