直鏈淀粉含量測試盒
測定意義與原理
測定意義
直鏈淀粉是一種線性多糖，由葡萄糖通過α-1,4糖苷鍵連接而成，在植物體內(nèi)與支鏈淀粉一起構(gòu)成淀粉顆粒。其含量是評價植物品質(zhì)和營養(yǎng)價值的重要指標(biāo)，檢測具有重要意義：食品工業(yè)：評估食品營養(yǎng)價值、控制食品加工過程和質(zhì)量農(nóng)業(yè)研究：研究植物生長發(fā)育、抗逆性機制和肥料效應(yīng)飼料工業(yè)：評估飼料營養(yǎng)價值和質(zhì)量基礎(chǔ)研究：了解植物能量代謝途徑和碳代謝調(diào)控機制
測定原理
碘比色法：直鏈淀粉與碘形成藍(lán)色復(fù)合物，在620nm處有特征吸收峰；支鏈淀粉與碘形成紅褐色復(fù)合物，在510nm處有特征吸收峰。通過雙波長比色法，扣除支鏈淀粉的干擾，計算直鏈淀粉含量。反應(yīng)式如下： 直鏈淀粉+碘→藍(lán)色復(fù)合物直鏈淀粉+碘→藍(lán)色復(fù)合物 支鏈淀粉+碘→紅褐色復(fù)合物支鏈淀粉+碘→紅褐色復(fù)合物
ELISA法：采用雙抗體夾心法，將直鏈淀粉與特異性抗體結(jié)合，通過酶標(biāo)二抗檢測結(jié)合的直鏈淀粉，根據(jù)吸光度值計算直鏈淀粉含量。
試劑盒組成
碘比色法試劑盒
組分 規(guī)格 作用說明
提取液 液體100mL×1瓶 用于提取樣本中的淀粉
碘試劑 液體100mL×1瓶 用于與淀粉反應(yīng)生成顏色復(fù)合物
直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品 1mL×1支 含直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液，濃度為10mg/mL
支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品 1mL×1支 含支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)液，濃度為10mg/mL
ELISA法試劑盒
組分 規(guī)格 作用說明
包被板 96孔×1塊 預(yù)包被抗直鏈淀粉單克隆抗體
酶標(biāo)抗體 液體6mL×1瓶 含HRP標(biāo)記抗直鏈淀粉抗體
標(biāo)準(zhǔn)品 液體1mL×6管 含0.1-10mg/mL直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品
樣本稀釋液 10mL×1瓶 用于稀釋樣本和標(biāo)準(zhǔn)品
顯色劑A液 6mL×1瓶 含過氧化氫溶液
顯色劑B液 6mL×1瓶 含TMB溶液
終止液 6mL×1瓶 含硫酸溶液
20倍濃縮洗滌液 20mL×1瓶 用于洗滌酶標(biāo)板
自備儀器與試劑
必備儀器
碘比色法：可見分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿/96孔板、研缽、電子天平
ELISA法：酶標(biāo)儀（450nm檢測通道）、96孔板、37℃恒溫箱、洗板機、可調(diào)式移液器、臺式離心機
必備耗材
離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器、超聲破碎儀
自備試劑：蒸餾水/去離子水、生理鹽水
樣本前處理方法
植物組織樣本取樣：稱取0.1g樣本，加入1mL提取液，研磨成勻漿提?。?0℃水浴30min，期間振蕩2-3次離心：8000g 4℃離心10min，取上清，用提取液定容至10mL，待測
糧食/飼料/食品樣本取樣：稱取0.1g樣本，加入1mL提取液，研磨成勻漿提?。?0℃水浴30min，期間振蕩2-3次離心：8000g 4℃離心10min，取上清，用提取液定容至10mL，待測
土壤樣本取樣：稱取1g樣本，加入10mL提取液，振蕩提取30min離心：8000g 4℃離心10min，取上清，待測
測定操作步驟
碘比色法操作儀器預(yù)熱：可見分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長到620nm和510nm，蒸餾水調(diào)零標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：
直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線：將直鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列濃度，各取0.1mL，加入0.9mL碘試劑，搖勻后測定620nm和510nm處的吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)曲線：將支鏈淀粉標(biāo)準(zhǔn)品稀釋成0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL系列濃度，各取0.1mL，加入0.9mL碘試劑，搖勻后測定620nm和510nm處的吸光值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線樣本測定：取0.1mL待測樣本，加入0.9mL碘試劑，搖勻后測定620nm和510nm處的吸光值
ELISA法操作試劑準(zhǔn)備：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，室溫平衡15-30分鐘；將20×洗滌緩沖液用蒸餾水20倍稀釋后備用加樣：
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加溫育：除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入HRP標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min洗滌：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）顯色：每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min終止：每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值結(jié)果計算：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按曲線方程計算樣本濃度
結(jié)果計算方法
單位定義
mg/g：每克樣本中直鏈淀粉的含量（mg）
mg/mL：每毫升樣本中直鏈淀粉的含量（mg）
碘比色法計算公式
A620=k1×C1+k2×C2A620=k1×C1+k2×C2 A510=k3×C1+k4×C2A510=k3×C1+k4×C2 C1=A620×k4?A510×k2k1×k4?k2×k3C1=k1×k4?k2×k3A620×k4?A510×k2 直鏈淀粉含量(mg/g)=C1×稀釋倍數(shù)×V總W直鏈淀粉含量(mg/g)=C1×稀釋倍數(shù)×WV總
A620：樣本在620nm處的吸光度值
A510：樣本在510nm處的吸光度值
k1：直鏈淀粉在620nm處的吸光系數(shù)
k2：支鏈淀粉在620nm處的吸光系數(shù)
k3：直鏈淀粉在510nm處的吸光系數(shù)
k4：支鏈淀粉在510nm處的吸光系數(shù)
C1：樣本中直鏈淀粉的濃度（mg/mL）
C2：樣本中支鏈淀粉的濃度（mg/mL）
V總：樣本提取液總體積（mL）
W：樣本質(zhì)量（g）
ELISA法計算公式
直鏈淀粉含量(mg/mL)=樣本OD值?空白OD值標(biāo)準(zhǔn)品OD值?空白OD值×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×稀釋倍數(shù)直鏈淀粉含量(mg/mL)=標(biāo)準(zhǔn)品OD值?空白OD值樣本OD值?空白OD值×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×稀釋倍數(shù)
性能指標(biāo)
指標(biāo) 碘比色法 ELISA法
線性范圍 0~1mg/mL 0.1-10mg/mL
最低檢測限 ≤0.01mg/mL ≤0.05mg/mL
回收率 90%~110% 90%~110%
批內(nèi)精密度 CV≤2.0% CV≤3.8%
批間精密度 CV≤5.0% CV≤8.5%
穩(wěn)定性 2-8℃保存6-12個月 -20℃保存6-12個月
注意事項
樣本處理：
樣本需新鮮制備，避免淀粉降解；-20℃可保存3個月
組織樣本需充分研磨，確保淀粉完全提取
提取過程中需控制溫度和時間，避免淀粉降解
試劑使用：
碘試劑需避光保存，避免碘揮發(fā)
不同批號試劑不能混用，需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
標(biāo)準(zhǔn)品需4℃保存，避免反復(fù)凍融
測定過程：
碘比色法需在室溫下測定，避免溫度影響顏色穩(wěn)定性
若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測定
質(zhì)量控制：
每次實驗需設(shè)置空白對照和質(zhì)控樣本
定期校準(zhǔn)儀器，確保檢測結(jié)果準(zhǔn)確性
若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確
公司正在出售的產(chǎn)品
β淀粉樣前體蛋白檢測試劑盒 β-APP ELISA Kit | HCT116+LUC人結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 |
抑絲蛋白3檢測試劑盒 PFN3 ELISA Kit | 小鼠原代胰腺腺泡上皮細(xì)胞 |
T淋巴細(xì)胞白血病病毒Ⅰ/II檢測試劑盒 HTLV-Ⅰ/II ELISA Kit | 小鼠胰腺腺泡上皮細(xì)胞 |
TU3A蛋白檢測試劑盒 TU3A ELISA Kit | 人牙齦成纖維細(xì)胞 HGF-1(STR鑒定正確) |
Trem樣轉(zhuǎn)錄因子1檢測試劑盒 TREML1 ELISA Kit | NCI-H295R (人腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞) (STR鑒定正確) |
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興奮性氨基SUAN轉(zhuǎn)運蛋白4檢測試劑盒 EAAT4 ELISA Kit | 產(chǎn)品：小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞 |
s腺苷同型半胱氨SUAN檢測試劑盒 SAH ELISA Kit | NCI-H929人骨髓瘤細(xì)胞 |
Syndecan-3/檢測試劑盒 SDC3 ELISA Kit | HMEC-1人微血管內(nèi)皮株細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
STEAP家族成員4檢測試劑盒 Steap4 ELISA Kit | 直鏈淀粉含量測試盒IM-9多發(fā)性骨髓瘤 |
STEAP家族成員1檢測試劑盒 Steap1 ELISA Kit | 人原代肺微血管周細(xì)胞 |
Stathmin 1檢測試劑盒 STMN1 ELISA Kit | 人乳腺癌細(xì)胞JIMT-1(STR鑒定正確) |
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