商品屬性
產(chǎn)品名稱(chēng) | 賴(lài)氨酸（LYS）測(cè)試盒 | 產(chǎn)品貨號(hào) | BH-9611121 |
規(guī)格 | 100管/96樣、50管/48樣 | 產(chǎn)品分類(lèi) | 氨基酸代謝系列 |
測(cè)試方法 | 微量法、可見(jiàn)分光光度法 | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
測(cè)定意義與原理
測(cè)定意義
賴(lài)氨酸（LYS）是人體必需氨基酸之一，其測(cè)定具有重要的臨床和科研價(jià)值：食品營(yíng)養(yǎng)檢測(cè)：LYS含量是評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值的重要指標(biāo)，尤其對(duì)于谷物和飼料臨床診斷：診斷和監(jiān)測(cè)營(yíng)養(yǎng)缺乏癥、肝臟疾病、腎臟疾病等農(nóng)業(yè)研究：研究植物氮代謝和品種選育生物學(xué)研究：了解蛋白質(zhì)合成和代謝調(diào)控機(jī)制
測(cè)定原理
分光光度法（茚三酮比色法）
LYS與茚三酮在堿性條件下反應(yīng)，生成藍(lán)紫色化合物，其吸收峰在570nm波長(zhǎng)處。通過(guò)測(cè)定570nm吸光度，即可計(jì)算LYS含量。反應(yīng)式如下： LYS+茚三酮→堿性條件,加熱藍(lán)紫色化合物L(fēng)YS+茚三酮堿性條件,加熱藍(lán)紫色化合物
ELISA法
采用雙抗體夾心原理，以特異性抗LYS抗體作為捕獲抗體，酶標(biāo)記抗LYS抗體作為檢測(cè)抗體，通過(guò)底物顯色反應(yīng)測(cè)定LYS含量。
HPLC法
LYS經(jīng)衍生化處理后，在高效液相色譜柱上分離，通過(guò)紫外檢測(cè)器或熒光檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)保留時(shí)間和峰面積定量。
試劑盒組成
分光光度法（茚三酮比色法）試劑盒
組分 規(guī)格 作用說(shuō)明
提取液 液體60mL×1瓶 含Tris-HCl緩沖液（pH8.0），用于提取樣本中的LYS
試劑一 液體6mL×1瓶 含茚三酮溶液，反應(yīng)底物
試劑二 液體6mL×1瓶 含緩沖液，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH值至堿性條件
試劑三 液體10mL×1瓶 含標(biāo)準(zhǔn)品（LYS），用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線
ELISA法試劑盒
組分 規(guī)格 作用說(shuō)明
包被板 96孔×1塊 預(yù)包被抗LYS單克隆抗體
酶標(biāo)抗體 液體6mL×1瓶 含HRP標(biāo)記抗LYS抗體
標(biāo)準(zhǔn)品 液體1mL×2瓶 含0μg/mL、20μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL LYS標(biāo)準(zhǔn)品
底物液 液體6mL×1瓶 含TMB底物液，顯色反應(yīng)試劑
終止液 液體6mL×1瓶 含2mol/L H?SO?溶液，終止顯色反應(yīng)
自備儀器與試劑
必備儀器
分光光度法：可見(jiàn)光分光光度計(jì)（570nm檢測(cè)通道）、1mL玻璃比色皿
ELISA法：酶標(biāo)儀（450nm檢測(cè)通道）、96孔板、洗板機(jī)
HPLC法：高效液相色譜儀、紫外檢測(cè)器/熒光檢測(cè)器、C18色譜柱
通用：電子天平、研缽、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液器
必備耗材
離心管（1.5mL/10mL）、一次性吸頭、研缽/組織勻漿器
自備試劑：蒸餾水/去離子水、乙酸乙酯、三氯乙酸、無(wú)水乙醇
樣本前處理方法
植物樣品取樣：取新鮮植物組織，清洗干凈，擦干，切碎，迅速稱(chēng)取0.4g勻漿：按植物組織：提取液=0.4g:2.0mL的比例加入提取液勻漿或研磨過(guò)濾：用無(wú)氨蒸餾水稀釋至40mL，混勻，用濾紙過(guò)濾，濾液即為L(zhǎng)YS粗提液，4℃保存?zhèn)溆帽４妫喝舨涣⒓礈y(cè)定，濾液需置于-20℃冷凍保存
食品/飼料樣品取樣：取粉碎后的食品或飼料樣品，準(zhǔn)確稱(chēng)取1g提取：加入10mL提取液，振蕩提取30min過(guò)濾：用濾紙過(guò)濾，取濾液備用去蛋白：若樣品含有大量蛋白質(zhì)，加入等體積去蛋白劑，混勻后10000g離心10min，取上清液
血清/尿液樣品血清/血漿：直接測(cè)定；若濃度過(guò)高，用提取液稀釋10-20倍尿液：離心去除沉淀，取上清液測(cè)定；或用提取液稀釋10-20倍
細(xì)胞或組織樣品細(xì)胞處理：收集1×10?細(xì)胞，加入1mL提取液，超聲波破碎（冰浴，功率20%，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）組織處理：稱(chēng)取0.1g組織，加入1mL提取液，冰浴勻漿離心：8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)
測(cè)定操作步驟
分光光度法操作儀器預(yù)熱：分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至570nm，蒸餾水調(diào)零標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：
取標(biāo)準(zhǔn)品用提取液稀釋成0、20、40、60、80、100μg/mL系列濃度
取1mL標(biāo)準(zhǔn)溶液于比色管中，加入1mL試劑一和1mL試劑二，混勻
沸水浴加熱15min，取出冷卻至室溫，用蒸餾水定容至10mL
以蒸餾水為參比，測(cè)定570nm波長(zhǎng)下的吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品測(cè)定：
取1mL樣品溶液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟操作，測(cè)定吸光度
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中LYS含量
ELISA法操作試劑準(zhǔn)備：將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出，室溫平衡15-30分鐘加樣：每孔加入樣本或標(biāo)準(zhǔn)品50μL，37℃孵育30min洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌3次，每次浸泡3min酶標(biāo)抗體：每孔加入酶標(biāo)抗體50μL，37℃孵育30min洗板：棄去孔內(nèi)液體，用洗滌液洗滌5次，每次浸泡3min顯色：每孔加入底物液50μL，37℃避光孵育15min終止：每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值結(jié)果計(jì)算：繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，按曲線方程計(jì)算樣本濃度
結(jié)果計(jì)算方法
單位定義
μg/g 鮮重：每克鮮重樣本中LYS的含量
μg/mL：每毫升樣本中LYS的含量
mg/L：每升樣本中LYS的含量
分光光度法計(jì)算公式
LYS含量(μg/g鮮重)=(A測(cè)定?A空白)×C標(biāo)×V總(A標(biāo)準(zhǔn)?A空白)×WLYS含量(μg/g鮮重)=(A標(biāo)準(zhǔn)?A空白)×W(A測(cè)定?A空白)×C標(biāo)×V總
A測(cè)定：樣本管吸光度值
A空白：空白管吸光度值
A標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管吸光度值
C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μg/mL）
V總：樣本提取液總體積（mL）
W：樣本質(zhì)量（g）
ELISA法計(jì)算公式
LYS含量(ng/mL)=樣本OD值?空白OD值標(biāo)準(zhǔn)品OD值?空白OD值×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×稀釋倍數(shù)LYS含量(ng/mL)=標(biāo)準(zhǔn)品OD值?空白OD值樣本OD值?空白OD值×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×稀釋倍數(shù)
HPLC法計(jì)算公式
LYS含量(mg/kg)=樣品峰面積×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×樣品稀釋倍數(shù)標(biāo)準(zhǔn)品峰面積×樣品質(zhì)量(g)×1000LYS含量(mg/kg)=標(biāo)準(zhǔn)品峰面積×樣品質(zhì)量(g)樣品峰面積×標(biāo)準(zhǔn)品濃度×樣品稀釋倍數(shù)×1000
性能指標(biāo)
指標(biāo) 茚三酮比色法 ELISA法 HPLC法
線性范圍 0~100μg/mL 0~400μg/mL 0~1000μg/mL
最低檢測(cè)限 ≤1μg/mL ≤0.1μg/mL ≤0.01μg/mL
回收率 90%~110% 95%~105% 98%~102%
批內(nèi)精密度 CV≤5.0% CV≤3.0% CV≤2.0%
批間精密度 CV≤8.0% CV≤5.0% CV≤3.0%
穩(wěn)定性 2-8℃保存12個(gè)月 2-8℃保存12個(gè)月 2-8℃保存12個(gè)月
注意事項(xiàng)
樣本處理：
樣本需新鮮制備，避免LYS分解；-20℃可保存3個(gè)月
植物組織需迅速處理，避免LYS氧化
液體樣本需避免溶血和細(xì)菌污染
試劑使用：
茚三酮溶液需避光保存，避免分解失效
ELISA法試劑需避免反復(fù)凍融，用后立即放回2-8℃保存
不同批號(hào)試劑不能混用，需重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線
測(cè)定過(guò)程：
茚三酮比色法反應(yīng)需沸水浴加熱15分鐘，確保反應(yīng)完全
ELISA法需嚴(yán)格控制溫育時(shí)間和溫度，避免影響顯色反應(yīng)
若吸光度值超出線性范圍，需稀釋樣本后重新測(cè)定
質(zhì)量控制：
每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置空白對(duì)照和質(zhì)控樣本
定期校準(zhǔn)儀器，確保檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性
若結(jié)果偏差較大，需檢查試劑是否變質(zhì)或樣本處理是否正確
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派瑞曼pyram?是上海博湖生物科技有限公司（Shanghai Bohu Biological Technology Co., Ltd.，China）的產(chǎn)品品牌。
派瑞曼pyram?是一家化學(xué)、生化和材料科學(xué)等領(lǐng)域的科研用研發(fā)產(chǎn)品的制造商和供應(yīng)商,我們的產(chǎn)品在相當(dāng)寬的基礎(chǔ)科學(xué)領(lǐng)域得到廣泛的應(yīng)用。 客戶(hù)包括學(xué)術(shù)界、工業(yè)界和政府的研究和開(kāi)發(fā)實(shí)驗(yàn)室以及制藥、生物技術(shù)、化工/石化行業(yè)等具商業(yè)規(guī)模的企業(yè)。
派瑞曼pyram?除包括化學(xué)、分析化學(xué)、生命科學(xué)、材料科學(xué)和病理科學(xué)產(chǎn)品。質(zhì)量是所有產(chǎn)品和服務(wù)最關(guān)鍵的組成部分,我們通過(guò)質(zhì)量和實(shí)力贏得客戶(hù)的信賴(lài)。產(chǎn)品的質(zhì)量是企業(yè)的生命。
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