人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱 人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞
組織來(lái)源 肺組織
默認(rèn)種屬 人，其他咨詢
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
| 英文名稱 | Human Alveolar Type II Epithelial Cells | 規(guī)格 | 5×105 |
| 細(xì)胞形態(tài) | 上皮細(xì)胞樣 | 貨號(hào) | P-X1254 |
培養(yǎng)信息：
自備試劑： 0.25%胰蛋白酶 、鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1×）或鼠尾膠原蛋白Ⅰ型（1 mg/mL） 、PBS、完全培養(yǎng)
基
包被條件： 鼠尾膠原Ⅰ（2-5 μg/cm2）
培養(yǎng)基： 人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞完全培養(yǎng)基(含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等)
換液頻率： 每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性： 貼壁
細(xì)胞形態(tài)： 上皮細(xì)胞樣
傳代比例： 1:2
傳代特性： 可傳1-2代左右
消化液： 0.25%胰蛋白酶
細(xì)胞簡(jiǎn)介 ：
人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞分離自肺組織；肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反
復(fù)分枝成無(wú)數(shù)細(xì)支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。小肺泡細(xì)胞，又稱I
型肺泡細(xì)胞，厚約0.1微米，基底部是基底膜，無(wú)增殖能力。大肺泡細(xì)胞，又稱Ⅱ型肺泡細(xì)胞，分泌表面活性物
質(zhì)（二棕櫚酰卵磷脂），以降低肺泡表面張力。Ⅱ型肺泡細(xì)胞位于Ⅰ型肺泡細(xì)胞之間，數(shù)量較Ⅰ型肺泡細(xì)胞多，
但覆蓋面積比Ⅰ型肺泡細(xì)胞小。細(xì)胞立方形或圓形,頂端突入肺泡腔。細(xì)胞核圓形，胞質(zhì)著色淺、呈泡沫狀。電鏡
下，細(xì)胞游離而有少量微絨毛，胞質(zhì)內(nèi)富含線粒體和溶酶體，有較發(fā)達(dá)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基復(fù)合體。核上方有
較多的分泌顆粒，電子密度高、大小不等，直徑約0.1-1.0 μm顆粒內(nèi)含有平行排列的板層狀結(jié)構(gòu)，稱為嗜餓性板
層小體。小體內(nèi)的主要成分為磷脂，以二棕櫚酰卵磷脂為主，此外還有糖胺多糖及蛋白質(zhì)等。顆粒內(nèi)物質(zhì)釋放出
來(lái)后，在肺泡表面形成一層粘液層，稱為表面活性物質(zhì)（surfactant）。表面活性物質(zhì)有降低肺泡表面張力、穩(wěn)
定肺泡大小的作用。呼氣時(shí)肺泡縮小，表面活性物質(zhì)密度增加，表面張力降低，防止肺泡過(guò)度塌陷；吸氣時(shí)肺泡
擴(kuò)張，表面活性物質(zhì)密度減小，肺泡回縮力加大，可防止肺泡過(guò)度膨脹。表面活性物質(zhì)的缺乏或變性均可引起肺
不張，過(guò)度通氣可造成表面活性物質(zhì)缺乏；吸入毒氣可直接破壞表面活性物質(zhì)。Ⅱ型肺泡細(xì)胞有分裂、增殖并分
化為Ⅰ型肺泡細(xì)胞的潛能，故具有修復(fù)受損傷上皮的作用。
方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞采用彈性蛋白酶消化法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10? cells
/瓶。
質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞經(jīng)SP-C免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、
HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)與傳代操作要點(diǎn)：
1?、使用專用培養(yǎng)基?
建議使用配套的原代上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基，添加2% FBS及生長(zhǎng)因子，以維持細(xì)胞增殖與分化能力。
?2、控制胰酶消化時(shí)間?
使用0.25%胰蛋白酶消化時(shí)，時(shí)間不宜超過(guò)3分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓即可終止消化。過(guò)度消化會(huì)損傷細(xì)胞膜
，影響貼壁與生長(zhǎng)。
?3、傳代比例與頻率?
原代人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞傳代能力有限，通常可傳1–2代，推薦按1:2至1:3比例傳代，每周換液2次。
?4、包被培養(yǎng)器皿?
轉(zhuǎn)移細(xì)胞至爬片、共聚焦皿等實(shí)驗(yàn)裝置前，需對(duì)器皿進(jìn)行包被處理，常用鼠尾膠原Ⅰ（2–5 μg/cm2）或PLL
（0.1 mg/mL）增強(qiáng)貼壁性。
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細(xì)胞分離步驟：
?一、組織處理?
在無(wú)菌條件下，將肺組織移入預(yù)冷PBS中沖洗，去除氣管、支氣管和小血管等非肺泡組織；
剪碎成約1 mm3的小塊，用冷PBS反復(fù)漂洗至液體澄清。
二、酶消化法?
加入0.25%胰酶，37℃恒溫震蕩水浴消化25–35分鐘；
添加含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yǎng)基終止消化，吹打均勻后經(jīng)200目金屬濾網(wǎng)過(guò)濾；
800 rpm離心5分鐘，棄上清，加入混合膠原酶繼續(xù)消化15–20分鐘，再次離心收集細(xì)胞沉淀。
三、純化方法?
?密度梯度離心?：使用Percoll或Ficoll不連續(xù)梯度離心，利用細(xì)胞沉降系數(shù)差異分離ATⅡ細(xì)胞；
?差速貼壁法?：先讓巨噬細(xì)胞貼壁，取未貼壁細(xì)胞進(jìn)行后續(xù)培養(yǎng)；
?磁珠分選?：通過(guò)特異性抗體結(jié)合磁珠，實(shí)現(xiàn)高純度分離。
關(guān)鍵字： 人Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞;上皮細(xì)胞樣; 貼壁;
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