人淋巴結(jié)成纖維細胞
產(chǎn)品信息：
產(chǎn)品名稱 人淋巴結(jié)成纖維細胞
組織來源 淋巴組織
種屬 人
產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25
英文名稱 | Human Lymph Node Fibroblast Cells | 規(guī)格 | 5×105 |
細胞形態(tài) | 成纖維細胞樣 | 貨號 | P-X1463 |
培養(yǎng)信息：
方法簡介：實驗室分離的人淋巴結(jié)成纖維細胞采用混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：實驗室分離的人淋巴結(jié)成纖維細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱：人淋巴結(jié)成纖維細胞
組織來源：淋巴組織
產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
培養(yǎng)信息：包被條件
培養(yǎng)基基礎(chǔ)培養(yǎng)基，含FBS、bFGF、Insulin、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：成纖維細胞樣
傳代特性：可傳3-5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)最佳
消化液：0.25%胰蛋白酶人淋巴結(jié)成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
細胞簡介 ：
人淋巴結(jié)成纖維細胞分離自淋巴組織；淋巴結(jié)是呈橢圓形或蠶豆形的淋巴組織小體，大小不一，新鮮時呈灰紅色。穿插于淋巴管的行程中，并與淋巴管相通連。淋巴結(jié)主要由淋巴組織和淋巴竇組成，外面包以致密結(jié)締組織被膜，被膜向淋巴結(jié)內(nèi)伸入，形成許多間隔或小梁，構(gòu)成淋巴結(jié)的網(wǎng)狀支架，并把淋巴結(jié)實質(zhì)分隔成許多部分。這些結(jié)締組織由成纖維細胞構(gòu)成，對淋巴管起到保護和支持作用。剛分離的成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細胞基本貼壁完全，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質(zhì)透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。
原代細胞分離：
組織樣本處理：取材后立即置于預(yù)冷的含抗生素的PBS或組織保存液中，避免樣本干燥和溫度變化；修剪時去除壞死、結(jié)締組織等雜質(zhì)，盡量減小組織塊體積以提高消化效率。
消化方法選擇：
酶消化法：根據(jù)組織類型選對應(yīng)酶（如胰蛋白酶用于上皮類組織、膠原酶用于結(jié)締組織豐富的組織），嚴格控制消化溫度（通常37℃）和時間，每隔5-10分鐘鏡下觀察，避免過度消化損傷細胞。
機械分離法：適合柔軟組織（如腦、肝臟），通過剪碎、吹打、過濾等方式分散細胞，操作時動作輕柔，減少細胞機械損傷。
細胞過濾與離心：用合適孔徑的細胞篩（如100-200目）過濾細胞懸液，去除未消化的組織塊；離心轉(zhuǎn)速通常為1000-1500rpm，時間5-10分鐘，避免高速離心導(dǎo)致細胞破裂。
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細胞消化與傳代：
方法一：利多卡因消化法
吸出培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞1次
添加1ml 12mM利多卡因消化液，輕輕轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶使液體覆蓋瓶底，37℃溫浴3-5分鐘
顯微鏡下觀察到細胞回縮變圓后，加入5ml完全培養(yǎng)基稀釋消化液
輕輕吹打混勻細胞，1200rpm離心5分鐘，棄上清后用完全培養(yǎng)基重懸接種
方法二：胰酶消化法
若利多卡因消化效果不佳，可更換為0.25%胰蛋白酶-EDTA消化液，重復(fù)上述操作，消化時間控制在1-2分鐘
方法三：細胞刮取法
若細胞仍無法消化，加入3ml完全培養(yǎng)基終止消化，用無菌細胞刮輕輕刮取細胞（此方法易造成細胞機械損傷，不推薦）
關(guān)鍵字： 人淋巴結(jié)成纖維細胞;成纖維細胞樣; 貼壁;
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