細(xì)胞簡(jiǎn)介：

大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞分離自腎組織；腎臟是機(jī)體的重要器官，它的基本功能是生成尿液，借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物，同時(shí)經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì)，如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、碳酸氫鈉等，以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護(hù)酸堿平衡。腎臟同時(shí)還有內(nèi)分泌功能，生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性維生素D3、前列腺素、激肽等，又為機(jī)體部分內(nèi)分泌激素的降解場(chǎng)所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能，保證了機(jī)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定，使新陳代謝得以正常進(jìn)行。腎小球是腎元中的用于將血液過濾生成原尿的一團(tuán)毛細(xì)血叢，被鮑氏囊所包裹，是尿液形成的重要構(gòu)造。血液經(jīng)由入球小動(dòng)脈進(jìn)入腎小球。腎小球內(nèi)的微血管不像其他微血管，匯流入靜脈，而是流入出球小動(dòng)脈。在腎小球內(nèi)，微血管受到高壓，而加速了超濾作用(hyperfiltration)的進(jìn)行。微血管中的血液經(jīng)由超濾作用之后，形成濾液，滲入鮑氏囊內(nèi)。腎小球與鮑氏囊合稱為腎小體，腎小球的過濾速率便稱為腎小球過濾率。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞是一類特殊微血管類型的細(xì)胞。細(xì)胞為圓形、多角形，單層貼壁生長(zhǎng)；細(xì)胞質(zhì)豐富，細(xì)胞核為圓形或卵圓形。腎小球內(nèi)皮細(xì)胞被覆于腎小球毛細(xì)血管壁腔側(cè)，與血流直接接觸，是腎小球?yàn)V過膜的第一道屏障，可粘附細(xì)菌和白細(xì)胞，修復(fù)基底膜，并有抗凝、抗血栓的作用；所以，體外培養(yǎng)的腎小球內(nèi)皮細(xì)胞在免疫學(xué)和病理生理學(xué)領(lǐng)域中具有重要的研究?jī)r(jià)值。

產(chǎn)品信息：

方法簡(jiǎn)介：實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞采用先機(jī)械研磨過不銹鋼網(wǎng)篩分離得到腎小球、后用膠原酶消化，結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

產(chǎn)品名稱：大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞

組織來(lái)源：腎組織

產(chǎn)品規(guī)格：5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

培養(yǎng)信息：包被條件PLL（0.1mg/ml）或明膠（0.1%）

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率:每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣

傳代特性：可傳2-3代

消化液：0.25%胰蛋白酶大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。
原代細(xì)胞實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：

一、取材與分離

新鮮、無(wú)菌：組織離體越快越好，全程冰上操作。

去除雜質(zhì)：剔除脂肪、結(jié)締組織、血污，減少污染和消化干擾。

溫和消化：

控制酶濃度、溫度、時(shí)間

及時(shí)終止消化，避免細(xì)胞過度損傷

過篩過濾：去除組織塊，獲得單細(xì)胞懸液。

二、接種與培養(yǎng)

密度關(guān)鍵：原代細(xì)胞普遍怕稀，密度太低不貼壁、不長(zhǎng)。

完全貼壁后再換液：剛接種別亂動(dòng)。

專用培養(yǎng)基：

內(nèi)皮、上皮、平滑肌、神經(jīng)元等盡量用專用原代培養(yǎng)基

血清質(zhì)量影響極大，建議批次驗(yàn)證

CO?、濕度、溫度嚴(yán)格穩(wěn)定，避免頻繁開關(guān)門。

三、傳代與凍存

不要等太滿：匯合度 70%–80% 就傳，不要等到堆積。

消化監(jiān)控：鏡下觀察細(xì)胞變圓、間隙變大立即終止。

凍存保護(hù)：

標(biāo)準(zhǔn)：90% 血清 + 10% DMSO

程序降溫，盡快轉(zhuǎn)入液氮

原代細(xì)胞凍存復(fù)蘇能力弱，盡量早凍、多凍。

四、污染與狀態(tài)判斷

一旦渾濁、pH 驟變、有顆粒：直接丟棄，不要救。

細(xì)胞狀態(tài)好：

形態(tài)均一、輪廓清晰

生長(zhǎng)均勻、無(wú)局部堆積

出現(xiàn)分化、拉長(zhǎng)、多核、空泡多：說(shuō)明老化 / 狀態(tài)差，不建議繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。
凍存復(fù)蘇：

凍存的梯度降溫：

逐步降溫：細(xì)胞凍存時(shí)，先在4℃放置30分鐘，再在-20℃放置1小時(shí)，隨后轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜，最后放入液氮長(zhǎng)期保存，避免溫度驟變導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)冰晶形成。

標(biāo)記清晰：凍存管上需標(biāo)記細(xì)胞名稱、代次、凍存日期和操作者姓名，避免后續(xù)復(fù)蘇時(shí)混淆。

復(fù)蘇的快速操作：

解凍后立即離心：細(xì)胞解凍后迅速轉(zhuǎn)移至含預(yù)熱培養(yǎng)基的離心管中，離心去除含DMSO的凍存液，減少DMSO對(duì)細(xì)胞的毒性。

復(fù)蘇后靜置培養(yǎng)：復(fù)蘇后的細(xì)胞接種后，24小時(shí)內(nèi)不要換液，讓細(xì)胞有足夠的時(shí)間恢復(fù)狀態(tài)，24小時(shí)后再更換新鮮培養(yǎng)基。

公司正在出售的產(chǎn)品：