產(chǎn)品介紹：

檢測原理與目的

檢測原理：基于 實時熒光定量 PCR（qPCR） 技術(shù)，采用 TaqMan 熒光探針法。試劑盒中含有針對 MON87427 品系特異性設計的引物和探針。在 PCR 擴增過程中，隨著目標 DNA 片段的指數(shù)級擴增，探針被酶切降解，釋放出熒光信號（通常為 FAM 通道）。儀器實時監(jiān)測熒光信號的累積，并根據(jù) Ct 值（循環(huán)閾值） 判定結(jié)果。

核心目的：用于食品、飼料、農(nóng)作物植株等樣品中 MON87427 轉(zhuǎn)基因玉米品系 的高特異性檢測和定量分析。

特異性鑒定：專一性地檢測樣品中是否含有 MON87427 品系。

定量分析：通過建立標準曲線，計算樣品中 MON87427 品系的拷貝數(shù)或占總玉米基因組的百分比。

?? 產(chǎn)品核心參數(shù)與組成

項目  詳細信息

檢測方法  實時熒光定量 PCR (TaqMan 探針法)

檢測靶標  轉(zhuǎn)基因玉米品系 MON87427

產(chǎn)品規(guī)格  48T (即 48 次測試)

檢測限  最低檢測限可達 0.04% (部分產(chǎn)品可達 10-100 拷貝/反應)

主要組分  A-MON87427-P (引物探針混合液)、NG-P (陰性對照)、PG-MON87427-P (陽性對照)

??? 操作流程

樣本處理：提取待測樣本（如玉米葉片、玉米粉、飼料等）的基因組 DNA。

試劑準備：在冰上將引物探針混合液與 qPCR 預混液按比例混合。

加樣：將 DNA 模板、陰性對照（無菌水）和陽性對照（試劑盒提供）加入到反應體系中。

qPCR 擴增：將反應板放入熒光定量 PCR 儀（如 ABI 7500、CFX 96 等）中，運行兩步法程序：

預變性：95℃ 10 分鐘

擴增循環(huán)：95℃ 15 秒 → 60℃ 1 分鐘 (采集熒光)，40-45 個循環(huán)。

結(jié)果分析：儀器自動分析擴增曲線和 Ct 值。

?? 結(jié)果判讀標準

結(jié)果類型  判讀標準  解釋

陽性 (+)  擴增曲線呈典型“S”型，且 Ct 值 ≤ 36-40。  樣品中檢測到 MON87427 基因片段，判定為含有轉(zhuǎn)基因玉米品系 MON87427。

陰性 (-)  無 Ct 值，或 Ct 值 ≥ 閾值，無指數(shù)增長期。  樣品中未檢測到 MON87427 基因片段，判定為陰性。

無效  陽性對照未擴增，或陰性對照出現(xiàn)擴增。  實驗失敗（可能存在試劑污染或失效），結(jié)果無效。

?? 注意事項

防止污染：由于該方法靈敏度極高，建議在獨立的潔凈區(qū)域進行操作，并使用帶濾芯的槍頭。

避光保存：反應液中的熒光染料對光敏感，試劑應避光保存和使用。

內(nèi)源基因?qū)φ眨簽榱舜_保檢測結(jié)果的準確性（排除假陰性），建議同時使用 玉米內(nèi)源基因檢測試劑盒（如玉米 Zein 基因或 HMG 基因）對樣本進行檢測，以確認樣本 DNA 提取成功且無 PCR 抑制物。

標準依據(jù)：該檢測方法通常參照《GB/T 19495.3-2004 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測 核酸提取純化方法》等相關(guān)標準進行。

公司正在出售的產(chǎn)品：

實驗操作規(guī)范

嚴格分區(qū)操作：試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、擴增區(qū)需物理隔離，防止氣溶膠污染。

每次實驗需設置陰性對照（無模板DNA）、陽性對照（已知PAT基因樣本）及空白對照（僅緩沖液）。

加樣時避免過量或不足，推薦低容量反應管以提高熱傳導率。

污染防控

定期監(jiān)測實驗室空氣、加樣槍及儀器表面污染，可通過擦拭采樣后擴增驗證。

擴增產(chǎn)物需在專用區(qū)域處理，避免開蓋時形成氣溶膠污染。