大鼠氣管平滑肌細(xì)胞

細(xì)胞簡(jiǎn)介 ：

大鼠氣管平滑肌分離自氣管組織；氣管（Trachea），呼吸器官的一部分；為后壁略平的圓筒型管狀。上端平第六頸椎下緣，與環(huán)狀軟骨相連；向下至第四、五胸椎體（相當(dāng)胸骨角平面）交界處，分左、右主支氣管，分叉處稱為氣管杈。氣管主要由14-16個(gè)半環(huán)狀軟骨構(gòu)成，有彈性，軟骨為“C”字形的軟骨環(huán)，缺口向后，各軟骨環(huán)以韌帶連接起來(lái)，環(huán)后方缺口處由平滑肌和致密結(jié)締組織連接，保持了持續(xù)張開(kāi)狀態(tài)。管腔襯以粘膜，表面覆蓋纖毛上皮，粘膜分泌的粘液可粘附吸入空氣中的灰塵顆粒，纖毛不斷向咽部擺動(dòng)將粘液與灰塵排出，以凈化吸入的氣體。氣管平滑肌是氣管的重要結(jié)構(gòu)組成之一，在機(jī)體的正常生理過(guò)程中發(fā)揮著重要作用；能夠保持氣道張力，維持氣道管狀形態(tài)，從而有利于氣體流通，保持肺部通氣。氣管平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。氣管平滑肌細(xì)胞的異常是呼吸道疾病的重要病理特征之一，其增生、肥大是氣道重塑的關(guān)鍵。

產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 大鼠氣管平滑肌細(xì)胞

英文名稱 Rat Tracheal Smooth Muscle Cells

組織來(lái)源 氣管

默認(rèn)種屬 大鼠

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠氣管平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠氣管平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合組織貼塊法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠氣管平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)操作方法：

核心特點(diǎn)

高度生理相關(guān)性：保留了體內(nèi)來(lái)源組織的結(jié)構(gòu)、功能和基因表達(dá)特征。

有限壽命：與無(wú)限增殖的腫瘤細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖能力有限，經(jīng)過(guò)一定次數(shù)的分裂后會(huì)進(jìn)入衰老期，這更符合正常細(xì)胞的生理狀態(tài)。

異質(zhì)性：初始培養(yǎng)物通常是多種細(xì)胞類型的混合物，有時(shí)需要通過(guò)差速貼壁等方法進(jìn)行純化。

操作要求高：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境、試劑質(zhì)量和無(wú)菌操作的要求極為嚴(yán)格，培養(yǎng)難度大于永生化細(xì)胞系。

組織塊培養(yǎng)法

取材與剪切

在無(wú)菌條件下取出組織，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、結(jié)締組織等非目標(biāo)成分。

用眼科剪將組織剪切成 0.5-1 mm3 的小塊。

接種

用吸管將組織塊均勻地貼附在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的內(nèi)表面，各組織塊之間保持一定間距（約0.5 cm）。

吸去多余液體，將培養(yǎng)器皿翻轉(zhuǎn)，放入 37℃、5% CO 的培養(yǎng)箱中，靜置 1-3小時(shí)，讓組織塊牢固貼壁。

加液培養(yǎng)

待組織塊貼壁后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，從一側(cè)緩慢加入足量的培養(yǎng)液，使組織塊浸沒(méi)在液體中，注意不要讓液體直接沖擊組織塊，以免沖起。

繼續(xù)在培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。通常 3-5天 后可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出。

公司正在出售的產(chǎn)品：

成功的原代培養(yǎng)依賴于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募?xì)節(jié)控制：

嚴(yán)格無(wú)菌操作：這是實(shí)驗(yàn)成功的基石。所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行，試劑和耗材必須無(wú)菌。

保持靜置：細(xì)胞接種后的最初24-48小時(shí)內(nèi)，應(yīng)保持培養(yǎng)瓶絕對(duì)靜置，避免頻繁取出觀察或晃動(dòng)，這有助于細(xì)胞貼壁和伸展。

優(yōu)化消化過(guò)程：

消化時(shí)間要恰到好處，過(guò)長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞，過(guò)短則細(xì)胞分散不佳。

膠原酶對(duì)組織的損傷較小，常用于分離活性要求高的細(xì)胞；胰蛋白酶作用較強(qiáng)，需嚴(yán)格控制時(shí)間。

酶液應(yīng)新鮮配制，避免活性下降。

控制接種密度：原代細(xì)胞在低密度下不易存活，建議適當(dāng)提高初始接種密度，以保證細(xì)胞間的相互作用促進(jìn)其生長(zhǎng)。

定期換液：根據(jù)培養(yǎng)基顏色變化（如變黃）或每隔2-3天更換一次培養(yǎng)液，以清除代謝廢物并補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。