產(chǎn)品介紹：
卵形瘧原蟲在形態(tài)學(xué)上與間日瘧原蟲相似，且目前已知存在兩個(gè)主要亞型：P. ovale curtisi 和 P. ovale wallikeri。使用普通鏡檢方法難以鑒別，且部分快速檢測(cè)試劑盒敏感性不穩(wěn)定，因此基于PCR的核酸檢測(cè)成為確診和分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
產(chǎn)品名稱 | 卵形瘧原蟲(Curtisi) 核酸檢測(cè)試劑盒 | 貨號(hào) | AP3256 |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR | 規(guī)格 | 50T |
?? 檢測(cè)原理
該試劑盒主要基于實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)。
核心機(jī)制： 針對(duì)卵形瘧原蟲 curtisi 亞型特有的基因序列（通常位于18S rRNA基因或tryptophan-rich antigen基因的保守區(qū)）設(shè)計(jì)特異性引物和探針。
特異性區(qū)分： 通過精心設(shè)計(jì)的引物探針組合，該試劑盒能夠特異性擴(kuò)增 curtisi 亞型，而不與 wallikeri 亞型、惡性瘧原蟲、間日瘧原蟲等其他瘧原蟲發(fā)生交叉反應(yīng)。
熒光檢測(cè)： 采用 TaqMan 探針法（通常標(biāo)記為FAM熒光素）。若樣本中含有 P. ovale curtisi 的DNA，PCR擴(kuò)增過程中會(huì)釋放熒光信號(hào)，儀器根據(jù)Ct值判斷樣本是否為陽性。
?? 主要特點(diǎn)與性能
特性 描述
高特異性 專門識(shí)別 P. ovale curtisi 亞型，有效區(qū)分 P. ovale wallikeri 亞型及其他四種人類瘧原蟲。
高靈敏度 最低檢測(cè)限通?？蛇_(dá) 1×103 Copies/mL（或 100-500 拷貝/毫升），顯著高于傳統(tǒng)顯微鏡鏡檢法。
快速高效 全程檢測(cè)時(shí)間約 2-3 小時(shí)（含核酸提?。詣?dòng)化程度高。
臨床價(jià)值 解決了鏡檢難以區(qū)分卵形瘧與間日瘧的難題，且能進(jìn)行亞型鑒定，指導(dǎo)精準(zhǔn)診療。
?? 臨床意義與應(yīng)用
精準(zhǔn)分型診斷： 卵形瘧原蟲的兩個(gè)亞型（curtisi 和 wallikeri）在臨床表現(xiàn)、復(fù)發(fā)率及實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)上可能存在差異。該試劑盒能精準(zhǔn)鎖定 curtisi 亞型，避免誤診漏診。
低密度感染檢測(cè)： 對(duì)于鏡檢陰性但臨床高度疑似（如不明原因發(fā)熱、有疫區(qū)旅居史）的患者，PCR檢測(cè)能發(fā)現(xiàn)低密度的隱性感染。
流行病學(xué)調(diào)查： 用于監(jiān)測(cè)不同地區(qū) P. ovale curtisi 的流行比例，為瘧疾防控策略提供數(shù)據(jù)支持。
適用樣本類型
抗凝全血： 首選樣本。通常使用EDTA或枸櫞酸鈉抗凝的靜脈血。
濾紙干血斑（DBS）： 適用于偏遠(yuǎn)地區(qū)或大規(guī)模現(xiàn)場(chǎng)篩查，樣本易于運(yùn)輸和保存。
?? 注意事項(xiàng)
操作環(huán)境： 必須嚴(yán)格分區(qū)操作（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)），防止擴(kuò)增產(chǎn)物污染導(dǎo)致假陽性。
核酸提取： DNA提取的質(zhì)量是檢測(cè)靈敏度的關(guān)鍵因素，建議使用高效的商業(yè)化核酸提取試劑盒。
結(jié)果解讀： Ct值 ≤ 35-40（視具體試劑盒說明書而定）且擴(kuò)增曲線呈典型“S”型判為陽性。陰性結(jié)果不能完全排除感染，需結(jié)合抗原檢測(cè)或血清學(xué)檢測(cè)綜合判斷。
混合感染： 需注意是否存在與其他瘧原蟲的混合感染，必要時(shí)使用通用型瘧原蟲試劑盒進(jìn)行復(fù)核。
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操作步驟：
整個(gè)流程遵循“?樣本處理 → 試劑配制 → 加樣 → 上機(jī)檢測(cè) → 結(jié)果分析?”的邏輯，核心是?防污染?和?精準(zhǔn)操作?。
?1. 樣本處理 (核酸提取)?
?樣本?：鼻咽拭子、咽拭子或痰液樣本。
?裂解?：將拭子浸入裂解液，充分混勻后室溫靜置10分鐘。
?提取?：采用?磁珠法或離心柱法?提取總RNA，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。
?保存?：洗脫后的RNA應(yīng)立即使用或分裝保存于?-80℃?。
?2. 試劑配制與加樣?
?反應(yīng)體系準(zhǔn)備?：在?試劑準(zhǔn)備區(qū)?配制Master Mix。根據(jù)待檢測(cè)樣本數(shù)計(jì)算總體積，通常按?樣本數(shù) + 1管陰性對(duì)照 + 1管陽性對(duì)照?的原則來配制。
?推薦體系?：例如，使用?20μL?體系的試劑盒，可包含?qPCR預(yù)混液16μL?、?引物探針混合液4μL?（具體體積請(qǐng)以實(shí)際說明書為準(zhǔn)）。
?分裝?：將配好的反應(yīng)體系分裝至PCR反應(yīng)管中（如?20μL/管?）。
?加樣?：在?樣本處理區(qū)?，分別向反應(yīng)管中加入?5μL?的模板RNA（樣本、陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控）。?蓋緊管蓋，短暫離心?，避免污染和氣泡。
?3. 上機(jī)檢測(cè)?
?運(yùn)行程序?：將反應(yīng)管放入熒光定量PCR儀，運(yùn)行預(yù)設(shè)程序。典型程序包括：
?逆轉(zhuǎn)錄?：50℃，15分鐘（將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA）。
?預(yù)變性?：95℃，10分鐘（激活Hot-Start Taq酶）。
?擴(kuò)增循環(huán)?：通常為40個(gè)循環(huán)，每個(gè)循環(huán)包括?變性（95℃，15秒）? 和 ?退火/延伸（60℃，45秒）?，儀器在退火/延伸步驟同時(shí)采集熒光信號(hào)。
?信號(hào)監(jiān)測(cè)?：儀器實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)變化，生成擴(kuò)增曲線。
?4. 結(jié)果分析與判定?
?Ct值?：儀器根據(jù)熒光曲線自動(dòng)計(jì)算閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）。
?結(jié)果判定?：
?陽性?：樣本Ct值 ?≤ 37?（具體閾值請(qǐng)以試劑盒說明書為準(zhǔn)），且擴(kuò)增曲線呈典型"S"型。
?陰性?：樣本無Ct值或Ct值 ?> 40?。
?無效?：陽性對(duì)照無Ct值或Ct值 ?> 35?，或陰性對(duì)照有Ct值，需?重新檢測(cè)?。
關(guān)鍵字： 卵形瘧原蟲 ;Curtisi;檢測(cè)試劑盒;
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)除包括化學(xué)、分析化學(xué)、生命科學(xué)和材料科學(xué)阿凡提(affandi)產(chǎn)品線外。 質(zhì)量是所有產(chǎn)品和服務(wù)最關(guān)鍵的組成部分，我們通過質(zhì)量和實(shí)力贏得客戶的信賴。產(chǎn)品的質(zhì)量是企業(yè)的生命。
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司(Shanghai Fusheng Industrial Co., Ltd.，China)先后與天津中醫(yī)學(xué)院、復(fù)旦大學(xué)、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院、上海交通大學(xué)、 華東師范大學(xué)、第二軍醫(yī)大學(xué)、南京大學(xué)，暨南大學(xué)，南京工業(yè)大學(xué)，曙光醫(yī)院、華山醫(yī)院、瑞金醫(yī)院、上海有機(jī)研究所、中科院上海分院等多家單位建立了良好的合作關(guān)系。
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