產(chǎn)品介紹：
克柔假絲酵母菌是一種重要的機會性致病真菌，屬于假絲酵母菌屬（念珠菌屬）。它天然對氟康唑等部分唑類抗真菌藥物耐藥，因此準確、快速地將其從其他念珠菌（如白假絲酵母菌、熱帶念珠菌）中鑒別出來，對于指導(dǎo)臨床用藥（通常首選棘白菌素類或兩性霉素B）具有至關(guān)重要的意義。
產(chǎn)品名稱 | 克柔假絲酵母核酸檢測試劑盒 | 貨號 | AP3273 |
產(chǎn)品分類 | 熒光PCR | 規(guī)格 | 50T |
1. 檢測原理與技術(shù)
該試劑盒主要基于實時熒光定量PCR（qPCR）技術(shù)，通常采用TaqMan探針法。
核心機制：
DNA提?。簭难囵B(yǎng)瓶、全血、痰液、支氣管肺泡灌洗液（BALF）或無菌體液等樣本中提取真菌的基因組DNA。
特異性擴增：針對克柔假絲酵母菌基因組中高度保守且具有種特異性的區(qū)域設(shè)計引物和探針。
常見靶標：ITS區(qū)域（內(nèi)轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)）、26S rRNA基因或種特異性蛋白編碼基因。
熒光檢測：如果樣本中存在克柔假絲酵母菌DNA，擴增過程中會釋放特定的熒光信號（通常標記為FAM或VIC通道）。
內(nèi)標質(zhì)控：試劑盒通常包含內(nèi)源性內(nèi)標（如人源基因）或外源性內(nèi)標，用于監(jiān)控DNA提取和PCR擴增過程，防止假陰性結(jié)果。
2. 試劑盒特點與性能
這類試劑盒專為真菌快速鑒定設(shè)計，具有以下顯著特點：
性能維度 描述
特異性 極高。引物和探針專門針對克柔假絲酵母菌設(shè)計，通常不會與白假絲酵母菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌等其他常見念珠菌發(fā)生交叉反應(yīng)。
靈敏度 高。最低檢測限通常可達 102～103 copies/mL，能有效檢測出微量真菌感染。
臨床價值 指導(dǎo)用藥。由于克柔假絲酵母菌對氟康唑天然耐藥，快速檢出可避免使用無效藥物，指導(dǎo)臨床直接選用敏感藥物。
檢測速度 快速。整個檢測流程（含核酸提?。┩ǔＴ?/span> 2-3 小時 內(nèi)完成，遠快于傳統(tǒng)培養(yǎng)法（需24-48小時）和藥敏試驗。
3. 適用樣本與應(yīng)用場景
適用樣本：
血培養(yǎng)報陽瓶：用于直接鑒定血流感染的病原體。
無菌體液：如腦脊液、胸水、腹水等。
呼吸道樣本：痰液、支氣管肺泡灌洗液（BALF）。
組織樣本：經(jīng)處理后的組織勻漿。
應(yīng)用場景：
血流感染診斷：快速鑒定真菌性敗血癥的病原體。
侵襲性真菌?。?/span>IFD）輔助診斷：用于高危人群（如ICU患者、造血干細胞移植受者、長期使用廣譜抗生素者）的早期診斷。
抗真菌治療方案制定：一旦檢出克柔假絲酵母菌，臨床醫(yī)生可考慮避開氟康唑，調(diào)整為更有效的抗真菌藥物。
4. 市場與研發(fā)動態(tài)
主要形式：
單重檢測試劑盒：專門針對克柔假絲酵母菌。
多重/多重聯(lián)檢試劑盒：市面上也有“念珠菌屬核酸檢測試劑盒（多重PCR法）”，可以在一個反應(yīng)體系中同時檢測并區(qū)分白假絲酵母菌、熱帶念珠菌、光滑念珠菌、克柔假絲酵母菌和近平滑念珠菌等常見致病念珠菌。
5. 操作注意事項
樣本處理：真菌細胞壁較厚，DNA提取時通常需要進行破壁步驟（如酶消化或機械破碎），否則可能導(dǎo)致假陰性。
防污染：PCR檢測極其靈敏，必須嚴格分區(qū)操作，防止擴增產(chǎn)物污染導(dǎo)致假陽性。
結(jié)果解讀：核酸檢測結(jié)果需結(jié)合患者的臨床表現(xiàn)、影像學(xué)檢查及其他實驗室檢查結(jié)果（如G試驗、GM試驗）綜合判斷。陽性結(jié)果表明存在克柔假絲酵母菌感染或定植，需結(jié)合標本來源（無菌部位 vs. 開放部位）判斷其臨床意義。
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操作步驟：
整個流程遵循“?樣本處理 → 試劑配制 → 加樣 → 上機檢測 → 結(jié)果分析?”的邏輯，核心是?防污染?和?精準操作?。
?1. 樣本處理 (核酸提取)?
?樣本?：鼻咽拭子、咽拭子或痰液樣本。
?裂解?：將拭子浸入裂解液，充分混勻后室溫靜置10分鐘。
?提取?：采用?磁珠法或離心柱法?提取總RNA，嚴格按照試劑盒說明書操作。
?保存?：洗脫后的RNA應(yīng)立即使用或分裝保存于?-80℃?。
?2. 試劑配制與加樣?
?反應(yīng)體系準備?：在?試劑準備區(qū)?配制Master Mix。根據(jù)待檢測樣本數(shù)計算總體積，通常按?樣本數(shù) + 1管陰性對照 + 1管陽性對照?的原則來配制。
?推薦體系?：例如，使用?20μL?體系的試劑盒，可包含?qPCR預(yù)混液16μL?、?引物探針混合液4μL?（具體體積請以實際說明書為準）。
?分裝?：將配好的反應(yīng)體系分裝至PCR反應(yīng)管中（如?20μL/管?）。
?加樣?：在?樣本處理區(qū)?，分別向反應(yīng)管中加入?5μL?的模板RNA（樣本、陽性質(zhì)控、陰性質(zhì)控）。?蓋緊管蓋，短暫離心?，避免污染和氣泡。
?3. 上機檢測?
?運行程序?：將反應(yīng)管放入熒光定量PCR儀，運行預(yù)設(shè)程序。典型程序包括：
?逆轉(zhuǎn)錄?：50℃，15分鐘（將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA）。
?預(yù)變性?：95℃，10分鐘（激活Hot-Start Taq酶）。
?擴增循環(huán)?：通常為40個循環(huán)，每個循環(huán)包括?變性（95℃，15秒）? 和 ?退火/延伸（60℃，45秒）?，儀器在退火/延伸步驟同時采集熒光信號。
?信號監(jiān)測?：儀器實時監(jiān)測熒光信號變化，生成擴增曲線。
?4. 結(jié)果分析與判定?
?Ct值?：儀器根據(jù)熒光曲線自動計算閾值循環(huán)數(shù)（Ct值）。
?結(jié)果判定?：
?陽性?：樣本Ct值 ?≤ 37?（具體閾值請以試劑盒說明書為準），且擴增曲線呈典型"S"型。
?陰性?：樣本無Ct值或Ct值 ?> 40?。
?無效?：陽性對照無Ct值或Ct值 ?> 35?，或陰性對照有Ct值，需?重新檢測?。
關(guān)鍵字： 克柔假絲酵母;檢測試劑盒;
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