細胞簡介：

大鼠腦微血管內皮分離自腦組織；腦微血管內皮細胞是血腦屏障的主要組成成分，它是組成腦微血管腔面單層扁平上皮樣細胞，能夠限制可溶性物質和細胞等從血液進入大腦，大腦微血管內皮細胞與外周內皮細胞相比具有一些相同特性。它所產生和分泌的生物活性物質對維持血管張力、調節(jié)血壓、抗血栓形成等有重要作用，在腦血管疾病的發(fā)病機制中有重要病理生理學意義。與外周內皮細胞相同，大腦微血管內皮細胞表面表達細胞粘附分子，調控白細胞進入大腦。由于微血管內皮細胞的器官特異性，內皮細胞通常取源于疾病研究的相關組織。其主要特征如下：①腦微血管內皮細胞存在許多細胞間緊密連接，產生很高的跨內皮阻抗，延遲細胞旁的通量；②腦微血管內皮細胞缺乏內皮細胞的窗孔結構，其液相物質胞飲水平較低；③腦微血管內皮細胞具有不對稱定位酶和載體介導轉運系統(tǒng)，從而產生“兩極分化”的表現(xiàn)型。

 產品信息:

產品名稱 大鼠腦微血管內皮細胞

組織來源 腦組織

默認種屬 大鼠

產品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

方法簡介 公司實驗室分離的大鼠腦微血管內皮采用膠原酶-混合消化法結合密度梯度離心法、后通過內皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

質量檢測 公司實驗室分離的大鼠腦微血管內皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

包被條件 PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 內皮細胞樣

傳代特性 可傳2-3代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠腦微血管內皮細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細胞培養(yǎng)步驟：

1. 細胞復蘇

運輸與接收：細胞以液氮凍存形式運輸，收到后立即用75%酒精噴灑消毒細胞瓶，置于超凈臺內無菌操作。

復蘇操作：將細胞瓶放入37℃、5% CO培養(yǎng)箱中靜置3-4小時穩(wěn)定狀態(tài)，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和密度，記錄初始狀態(tài)（建議40x、100x、200x各拍一張照片）。

2. 細胞傳代

傳代時機：當細胞密度達80%匯合度時進行傳代。

操作步驟：

棄去舊培養(yǎng)基，用無鈣鎂PBS潤洗細胞1-2次。

加入0.25%胰蛋白酶消化液（1-2 mL），37℃孵育1-2分鐘，顯微鏡下觀察細胞變圓脫落。

加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細胞完全脫落。

離心（1000 RPM，5分鐘），棄上清，用1-2 mL培養(yǎng)基重懸。

按1:2比例分瓶傳代（如T25瓶分至兩個T25瓶），補充新鮮培養(yǎng)基至5 mL。

換液頻率：每2-3天換液一次。

3. 細胞凍存

凍存液：使用無血清凍存液。

凍存步驟：細胞傳代后，用胰蛋白酶消化并離心，重懸于凍存液，緩慢降溫至-80℃，最終轉入液氮長期保存。

公司正在出售的產品：

原代細胞培養(yǎng)（Primary Culture）是指從機體中直接取出組織或器官，通過酶消化或機械方法分散成單個細胞或組織塊，

在體外模擬體內環(huán)境進行首次培養(yǎng)的過程。由于原代細胞剛從活體組織分離，其生物學特性、遺傳背景和功能狀態(tài)最接近體內真實情況，

因此在藥物篩選、毒理學研究、疾病機制探索和病毒學等領域具有不可替代的價值。

高度生理相關性：保留了體內來源組織的結構、功能和基因表達特征。

有限壽命：與無限增殖的腫瘤細胞系不同，原代細胞增殖能力有限，經(jīng)過一定次數(shù)的分裂后會進入衰老期，這更符合正常細胞的生理狀態(tài)。

異質性：初始培養(yǎng)物通常是多種細胞類型的混合物，有時需要通過差速貼壁等方法進行純化。

操作要求高：對培養(yǎng)環(huán)境、試劑質量和無菌操作的要求極為嚴格，培養(yǎng)難度大于永生化細胞系。