大鼠嗅鞘細(xì)胞

細(xì)胞簡介 ：

大鼠嗅鞘分離自嗅球組織；嗅鞘細(xì)胞（OECs）是在功能上介于施旺細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞之間的一種特殊的膠質(zhì)細(xì)胞，具有神經(jīng)營養(yǎng)、抑制膠質(zhì)增生、瘢痕形成、成鞘作用等；為軸突生長提供了適宜的微環(huán)境及較強(qiáng)的遷移的特性，使其成為促進(jìn)中樞神經(jīng)再生的理想候選細(xì)胞之一。嗅鞘細(xì)胞是目前所發(fā)現(xiàn)的極少數(shù)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)可以再生細(xì)胞之一，其特點(diǎn)為終身具有神經(jīng)再生功能，還能夠釋放多種神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)粘附分子。被認(rèn)為是髓鞘化能力強(qiáng)的膠質(zhì)細(xì)胞，逐漸用于治療脊髓損傷。嗅鞘細(xì)胞與膠質(zhì)細(xì)胞、雪旺細(xì)胞在表現(xiàn)型上有共同點(diǎn)，它們都能促進(jìn)軸突的再生，主要區(qū)別在于嗅鞘細(xì)胞不但存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，也存在于外周神經(jīng)中。嗅鞘細(xì)胞被認(rèn)為是一種可塑性很高的細(xì)胞，它可表現(xiàn)出多種細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞表面標(biāo)志，在嗅系統(tǒng)發(fā)育過程中，嗅鞘細(xì)胞根據(jù)其在組織定位的不同而有不同的抗原表型，其中P75NTR、GFAP、和O4可標(biāo)記大部分在體嗅鞘細(xì)胞，然而在嗅球外神經(jīng)層O4陽性嗅鞘細(xì)胞仍然可以在P75NTR陽性細(xì)胞層內(nèi)分化成E-NCAM陽性的細(xì)胞層，還有一定比率的嗅鞘細(xì)胞P75NTR陰性而NY和S100表型為陽性。嗅黏膜中的神經(jīng)元是生后才生長并在成年時(shí)繼續(xù)分化的神經(jīng)元，壽命為4-12周，隨著新細(xì)胞的生長，又建立了新的神經(jīng)支配關(guān)系。嗅鞘細(xì)胞存在于嗅神經(jīng)及嗅球的神經(jīng)層上，沿嗅神經(jīng)的全長，從周圍神經(jīng)系統(tǒng)到中樞神經(jīng)分布。

 產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 大鼠嗅鞘細(xì)胞

英文名稱 Rat Olfactory Ensheathing Cells

組織來源 嗅球組織

默認(rèn)種屬 大鼠

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

培養(yǎng)信息：

包被條件 PLL（0.1mg/ml）

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

大鼠嗅鞘細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡介 公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅鞘采用-膠原酶聯(lián)合消化法、結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 公司實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠嗅鞘經(jīng)GFAP免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)操作方法：

核心特點(diǎn)

高度生理相關(guān)性：保留了體內(nèi)來源組織的結(jié)構(gòu)、功能和基因表達(dá)特征。

有限壽命：與無限增殖的腫瘤細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖能力有限，經(jīng)過一定次數(shù)的分裂后會(huì)進(jìn)入衰老期，這更符合正常細(xì)胞的生理狀態(tài)。

異質(zhì)性：初始培養(yǎng)物通常是多種細(xì)胞類型的混合物，有時(shí)需要通過差速貼壁等方法進(jìn)行純化。

操作要求高：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境、試劑質(zhì)量和無菌操作的要求極為嚴(yán)格，培養(yǎng)難度大于永生化細(xì)胞系。

組織塊培養(yǎng)法

取材與剪切

在無菌條件下取出組織，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、結(jié)締組織等非目標(biāo)成分。

用眼科剪將組織剪切成 0.5-1 mm3 的小塊。

接種

用吸管將組織塊均勻地貼附在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的內(nèi)表面，各組織塊之間保持一定間距（約0.5 cm）。

吸去多余液體，將培養(yǎng)器皿翻轉(zhuǎn)，放入 37℃、5% CO的培養(yǎng)箱中，靜置 1-3小時(shí)，讓組織塊牢固貼壁。

加液培養(yǎng)

待組織塊貼壁后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，從一側(cè)緩慢加入足量的培養(yǎng)液，使組織塊浸沒在液體中，注意不要讓液體直接沖擊組織塊，以免沖起。

繼續(xù)在培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。通常 3-5天 后可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長出。

公司正在出售的產(chǎn)品：

成功的原代培養(yǎng)依賴于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募?xì)節(jié)控制：

嚴(yán)格無菌操作：這是實(shí)驗(yàn)成功的基石。所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行，試劑和耗材必須無菌。

保持靜置：細(xì)胞接種后的最初24-48小時(shí)內(nèi)，應(yīng)保持培養(yǎng)瓶絕對(duì)靜置，避免頻繁取出觀察或晃動(dòng)，這有助于細(xì)胞貼壁和伸展。

優(yōu)化消化過程：

消化時(shí)間要恰到好處，過長會(huì)損傷細(xì)胞，過短則細(xì)胞分散不佳。

膠原酶對(duì)組織的損傷較小，常用于分離活性要求高的細(xì)胞；胰蛋白酶作用較強(qiáng)，需嚴(yán)格控制時(shí)間。

酶液應(yīng)新鮮配制，避免活性下降。

控制接種密度：原代細(xì)胞在低密度下不易存活，建議適當(dāng)提高初始接種密度，以保證細(xì)胞間的相互作用促進(jìn)其生長。

定期換液：根據(jù)培養(yǎng)基顏色變化（如變黃）或每隔2-3天更換一次培養(yǎng)液，以清除代謝廢物并補(bǔ)充營養(yǎng)。