小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞

細(xì)胞簡(jiǎn)介 ：

小鼠結(jié)腸平滑肌分離自結(jié)腸組織；結(jié)腸在右髂窩內(nèi)續(xù)于盲腸，在第3骶椎平面連接直腸。結(jié)腸分升結(jié)腸、橫結(jié)腸、降結(jié)腸和乙狀結(jié)腸4部分，大部分固定于腹后壁，結(jié)腸的排列酷似英文字母“M”，將小腸包圍在內(nèi)。結(jié)腸橫切面由內(nèi)到外依次為：黏膜（上皮層、固有層、黏膜肌層），黏膜下層（疏松結(jié)締組織），肌層（內(nèi)環(huán)形、外縱行兩層平滑?。?，外膜（纖維膜或漿膜）。結(jié)腸平滑肌細(xì)胞主要分布于黏膜肌層和肌層的內(nèi)環(huán)形、外縱行平滑?。唤Y(jié)腸運(yùn)動(dòng)少而緩慢，對(duì)刺激的反應(yīng)也較遲緩。結(jié)腸平滑肌在食物消化與吸收、腸道運(yùn)動(dòng)和物質(zhì)分泌、誘發(fā)全身炎癥反應(yīng)以及細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑等研究中起著重要的作用。結(jié)腸平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。結(jié)腸平滑肌運(yùn)動(dòng)活性受到神經(jīng)遞質(zhì)、胃腸激素和藥物等因素的調(diào)節(jié)。隨著現(xiàn)代胃腸動(dòng)力學(xué)研究的進(jìn)展，對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)的研究已從器官、組織水平發(fā)展到細(xì)胞、分子水平，要求在胃腸道單個(gè)平滑肌細(xì)胞標(biāo)本上來完成各種電生理、藥理和分子生物學(xué)等實(shí)驗(yàn)。體外培養(yǎng)細(xì)胞，由于影響因素單一，是研究細(xì)胞功能以及相應(yīng)的細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的基礎(chǔ)。

 產(chǎn)品信息：

產(chǎn)品名稱 小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞

英文名稱 Mouse Colonic Smooth Muscle Cells

組織來源 結(jié)腸組織

默認(rèn)種屬 小鼠

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳3代左右

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

方法簡(jiǎn)介 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠結(jié)腸平滑肌采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠結(jié)腸平滑肌經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)操作方法：

核心特點(diǎn)

高度生理相關(guān)性：保留了體內(nèi)來源組織的結(jié)構(gòu)、功能和基因表達(dá)特征。

有限壽命：與無限增殖的腫瘤細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖能力有限，經(jīng)過一定次數(shù)的分裂后會(huì)進(jìn)入衰老期，這更符合正常細(xì)胞的生理狀態(tài)。

異質(zhì)性：初始培養(yǎng)物通常是多種細(xì)胞類型的混合物，有時(shí)需要通過差速貼壁等方法進(jìn)行純化。

操作要求高：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境、試劑質(zhì)量和無菌操作的要求極為嚴(yán)格，培養(yǎng)難度大于永生化細(xì)胞系。

組織塊培養(yǎng)法

取材與剪切

在無菌條件下取出組織，用Hanks液或PBS清洗，去除血污和脂肪、結(jié)締組織等非目標(biāo)成分。

用眼科剪將組織剪切成 0.5-1 mm3 的小塊。

接種

用吸管將組織塊均勻地貼附在培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶的內(nèi)表面，各組織塊之間保持一定間距（約0.5 cm）。

吸去多余液體，將培養(yǎng)器皿翻轉(zhuǎn)，放入 37℃、5% CO的培養(yǎng)箱中，靜置 1-3小時(shí)，讓組織塊牢固貼壁。

加液培養(yǎng)

待組織塊貼壁后，輕輕翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，從一側(cè)緩慢加入足量的培養(yǎng)液，使組織塊浸沒在液體中，注意不要讓液體直接沖擊組織塊，以免沖起。

繼續(xù)在培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。通常 3-5天 后可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出。

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關(guān)鍵操作技巧與注意事項(xiàng)：

成功的原代培養(yǎng)依賴于嚴(yán)謹(jǐn)?shù)募?xì)節(jié)控制：

嚴(yán)格無菌操作：這是實(shí)驗(yàn)成功的基石。所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行，試劑和耗材必須無菌。

保持靜置：細(xì)胞接種后的最初24-48小時(shí)內(nèi)，應(yīng)保持培養(yǎng)瓶絕對(duì)靜置，避免頻繁取出觀察或晃動(dòng)，這有助于細(xì)胞貼壁和伸展。

優(yōu)化消化過程：

消化時(shí)間要恰到好處，過長(zhǎng)會(huì)損傷細(xì)胞，過短則細(xì)胞分散不佳。

膠原酶對(duì)組織的損傷較小，常用于分離活性要求高的細(xì)胞；胰蛋白酶作用較強(qiáng)，需嚴(yán)格控制時(shí)間。

酶液應(yīng)新鮮配制，避免活性下降。

控制接種密度：原代細(xì)胞在低密度下不易存活，建議適當(dāng)提高初始接種密度，以保證細(xì)胞間的相互作用促進(jìn)其生長(zhǎng)。

定期換液：根據(jù)培養(yǎng)基顏色變化（如變黃）或每隔2-3天更換一次培養(yǎng)液，以清除代謝廢物并補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)。