細(xì)胞簡(jiǎn)介：

小鼠肝內(nèi)膽管上皮分離自肝臟組織；肝臟是身體內(nèi)以代謝功能為主的一個(gè)器官，并在身體里面起著去氧化、儲(chǔ)存肝糖、分泌性蛋白質(zhì)的合成等作用；肝臟也制造消化系統(tǒng)中之膽汁。肝臟是機(jī)體內(nèi)臟里大的器官，位于機(jī)體中的腹部位置，在右側(cè)橫隔膜之下，位于膽囊之前端且于右邊腎臟的前方，胃的上方。肝臟是機(jī)體消化系統(tǒng)中大的消化腺，為一紅棕色的V字形器官。肝臟是尿素合成的主要器官，又是新陳代謝的重要器官。肝臟在機(jī)體位置和形態(tài)結(jié)構(gòu)：肝臟位于右上腹，隱藏在右側(cè)膈下和肋骨深面，大部分肝為肋弓所復(fù)蓋，僅在腹上區(qū)、右肋弓間露出并直接接觸腹前壁，肝上面則與膈及腹前壁相接。通過(guò)控制激素調(diào)控的分泌和吸收，在保持、調(diào)整和擴(kuò)大膽小管的結(jié)構(gòu)中發(fā)揮重要作用，肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞在先天性和獲得性免疫應(yīng)答方面起著積極作用。肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞約占肝細(xì)胞總數(shù)的5%，其在肝內(nèi)膽道系統(tǒng)內(nèi)形成復(fù)雜的網(wǎng)狀管形結(jié)構(gòu)。肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞具有復(fù)雜的生理代謝功能，參與肝臟的代謝、排泌、免疫等生理過(guò)程，在肝臟疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起一定的作用。研究表明，常見(jiàn)的肝內(nèi)膽管病變例如原發(fā)性硬化性膽管炎、膽管癌等疾病，都是以肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞為病變靶位，進(jìn)而引起肝內(nèi)膽管上皮損傷。因此，了解正常肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的生物學(xué)特征和病變肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞的病理特征對(duì)研究肝內(nèi)膽管病變的發(fā)病機(jī)制、診斷和治療具有重要意義。

產(chǎn)品信息:

產(chǎn)品名稱(chēng) 小鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞

組織來(lái)源 肝臟組織

默認(rèn)種屬 小鼠

產(chǎn)品規(guī)格 5×10^5Cells/T25

方法簡(jiǎn)介 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝內(nèi)膽管上皮采用膠原酶灌注消化法后，再用膠原酶-DNA酶聯(lián)合消化，接種至預(yù)先包被鼠尾膠原的培養(yǎng)瓶中，通過(guò)上皮細(xì)胞專(zhuān)用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè) 公司實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠肝內(nèi)膽管上皮經(jīng)Cytokeratin-19免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息

包被條件 鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）

培養(yǎng)基 含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 上皮細(xì)胞樣

傳代特性 可傳1-2代

消化液 0.25%

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

小鼠肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞培養(yǎng)步驟：

1. 細(xì)胞復(fù)蘇

運(yùn)輸與接收：細(xì)胞以液氮凍存形式運(yùn)輸，收到后立即用75%酒精噴灑消毒細(xì)胞瓶，置于超凈臺(tái)內(nèi)無(wú)菌操作。

復(fù)蘇操作：將細(xì)胞瓶放入37℃、5% CO培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)穩(wěn)定狀態(tài)，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)和密度，記錄初始狀態(tài)（建議40x、100x、200x各拍一張照片）。

2. 細(xì)胞傳代

傳代時(shí)機(jī)：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%匯合度時(shí)進(jìn)行傳代。

操作步驟：

棄去舊培養(yǎng)基，用無(wú)鈣鎂PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

加入0.25%胰蛋白酶消化液（1-2 mL），37℃孵育1-2分鐘，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞變圓脫落。

加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細(xì)胞完全脫落。

離心（1000 RPM，5分鐘），棄上清，用1-2 mL培養(yǎng)基重懸。

按1:2比例分瓶傳代（如T25瓶分至兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基至5 mL。

換液頻率：每2-3天換液一次。

3. 細(xì)胞凍存

凍存液：使用無(wú)血清凍存液。

凍存步驟：細(xì)胞傳代后，用胰蛋白酶消化并離心，重懸于凍存液，緩慢降溫至-80℃，最終轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

使用細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)注意以下幾點(diǎn)：

代數(shù)控制：盡量在低代數(shù)（如P3-P10）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以防止因傳代過(guò)多導(dǎo)致的遺傳漂移或功能衰退。

操作輕柔：原代細(xì)胞對(duì)環(huán)境變化敏感，解凍和傳代時(shí)需格外小心，避免機(jī)械損傷。

營(yíng)養(yǎng)需求：它們往往需要更復(fù)雜的營(yíng)養(yǎng)成分（如特定的生長(zhǎng)因子、血清），普通的培養(yǎng)基可能無(wú)法滿(mǎn)足其生長(zhǎng)需求。