檢驗(yàn)原理
本試劑盒基于染料法熒光定量RT-PCR技術(shù)，針對(duì)禽戊型肝炎病毒RNA保守區(qū)設(shè)計(jì)特異性引物，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光監(jiān)測(cè)擴(kuò)增過(guò)程，實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒RNA的定性或定量檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 禽戊型肝炎病毒染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 英文名稱 | Avian Hepatitis E Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
產(chǎn)品規(guī)格 | 50T | 產(chǎn)品分類 | 熒光定量PCR |
檢測(cè)類型 | PCR檢測(cè) | 產(chǎn)品貨號(hào) | PR4418 |
產(chǎn)品特點(diǎn)
高靈敏度：優(yōu)化引物設(shè)計(jì)，檢測(cè)限可達(dá)1000拷貝/反應(yīng)。
特異性強(qiáng)：引物針對(duì)HEV高度保守區(qū)，避免與其他病原體交叉反應(yīng)。
即開即用：預(yù)混反應(yīng)體系，用戶僅需提供RNA模板。
雙重用途：支持定性和定量檢測(cè)，定量線性范圍覆蓋5個(gè)數(shù)量級(jí)。
質(zhì)控完備：含陽(yáng)性和陰性對(duì)照，確保結(jié)果可靠性。
試劑組成
酶混合液：50 μL ×1管
反應(yīng)預(yù)混液：500 μL ×2管
陽(yáng)性質(zhì)控品（HEV RNA）：50 μL ×1管
陰性質(zhì)控品（無(wú)核酸水）：250 μL ×1管
注：不同批號(hào)組分不可混用。
適用儀器
兼容主流熒光定量PCR儀，包括：
ABI 7500
Agilent Mx3000P/3005P
Roche LightCycler
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf RealPlex
樣本要求
組織樣本：取禽類肝臟組織，勻漿后提取RNA。
血液樣本：采集全血5 mL，抗凝處理后分離血漿/血清。
保存條件：短期（24 h內(nèi)）可于2~8℃保存；長(zhǎng)期需-70℃以下凍存，避免反復(fù)凍融（≤3次）。
操作步驟
RNA提?。喊礃?biāo)準(zhǔn)方法提取樣本RNA，建議使用商品化RNA提取試劑盒。
反應(yīng)體系配制：按20 μL體系加入反應(yīng)液、酶液及模板RNA。
PCR程序設(shè)置：
逆轉(zhuǎn)錄：50℃ 15分鐘
預(yù)變性：95℃ 3分鐘
擴(kuò)增循環(huán)（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（熒光采集）
結(jié)果判讀：
定性檢測(cè)：Ct值＜40為陽(yáng)性；≥40或無(wú)信號(hào)為陰性。
定量檢測(cè)：通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本拷貝數(shù)。
注意事項(xiàng)
實(shí)驗(yàn)需在無(wú)菌環(huán)境下操作，避免RNA酶污染。
試劑保存于-20℃±5℃，避光運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融（≤5次）。
若陽(yáng)性對(duì)照無(wú)擴(kuò)增或陰性對(duì)照出現(xiàn)Ct值，需重新檢測(cè)。
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關(guān)鍵字： 禽戊型肝炎病毒;染料法熒光定量;PCR試劑盒;
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