基于雙抗體夾心法原理。將抗大鼠PRhoA抗體包被在酶標(biāo)板上，樣本和標(biāo)準(zhǔn)品中的PRhoA與包被抗體結(jié)合，接著加入生物素化的抗大鼠PRhoA抗體，形成免疫復(fù)合物，再加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合，加入TMB底物顯色，根據(jù)OD值與標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出樣本中PRhoA的濃度。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠磷酸化Ras同源基因家族成員A(PRhoA)elisa試劑盒 | 靈敏度 | 0.078125ng/ml |
英文名稱 | RatPRhoA elisa kit | 貨號(hào) | PR8043 |
檢測(cè)范圍 | 0.15625ng/ml-10ng/ml | 品牌 | 派瑞曼 |
夾心法數(shù)據(jù)：
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| 校準(zhǔn)品濃度(ng/mL) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.691 | 1.552 | 0.828 | 0.488 | 0.355 | 0.173 | 0.097 | 0.030 |
| 校正OD值 | 2.660 | 1.521 | 0.798 | 0.458 | 0.325 | 0.142 | 0.067 | 0.000 |
夾心法標(biāo)曲：
核心參數(shù)：
原理：磷酸化特異性雙抗體夾心法 ELISA
種屬：大鼠特異性
樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清、組織勻漿
時(shí)長(zhǎng)：3-4h
保存：2-8℃避光冷藏
特異性：專一識(shí)別磷酸化 RhoA
板內(nèi) CV：＜8%
操作步驟:
從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；
樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；空白孔不加。
除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液。靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。
每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
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關(guān)鍵字： 大鼠磷酸化Ras同源基因家族成員A;PRhoA;elisa試劑盒;
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