運(yùn)用雙抗體夾心法。包被抗大鼠p-MLKL抗體于酶標(biāo)板，樣本和標(biāo)準(zhǔn)品中的p-MLKL與包被抗體結(jié)合，然后加入生物素化的抗大鼠p-MLKL抗體，形成免疫復(fù)合物，再加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素結(jié)合，加入TMB底物顯色，顏色深淺與p-MLKL含量成正比，通過(guò)酶標(biāo)儀讀數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本中p-MLKL的濃度。
產(chǎn)品名稱 | 大鼠磷酸化混合譜系激酶域樣蛋白(p-MLKL)elisa試劑盒 | 靈敏度 | 0.078125ng/ml |
英文名稱 | Ratp-MLKL elisa kit | 貨號(hào) | PR8084 |
檢測(cè)范圍 | 0.15625ng/ml-10ng/ml | 品牌 | 派瑞曼 |
夾心法數(shù)據(jù)：
以下數(shù)據(jù)和曲線僅供參考，實(shí)驗(yàn)者需根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。
| 校準(zhǔn)品濃度(ng/mL) | 10.00 | 5.00 | 2.50 | 1.25 | 0.63 | 0.31 | 0.16 | 0.00 |
| OD450/630值 | 2.691 | 1.552 | 0.828 | 0.488 | 0.355 | 0.173 | 0.097 | 0.030 |
| 校正OD值 | 2.660 | 1.521 | 0.798 | 0.458 | 0.325 | 0.142 | 0.067 | 0.000 |
夾心法標(biāo)曲：
核心參數(shù)：
原理：磷酸化特異性雙抗體夾心法 ELISA
種屬：大鼠特異性
樣本：血清、血漿、細(xì)胞上清、組織勻漿
時(shí)長(zhǎng)：3-4h
保存：2-8℃避光冷藏
特異性：特異性識(shí)別磷酸化 MLKL
板內(nèi) CV：＜8%
關(guān)鍵注意事項(xiàng):
實(shí)驗(yàn)操作需嚴(yán)格按照說(shuō)明書標(biāo)注的時(shí)間、加液量及順序進(jìn)行，溫育溫度和時(shí)間誤差會(huì)影響結(jié)果準(zhǔn)確性
不同批次的試劑盒組分不能混用（洗滌液和終止液除外）；試劑瓶蓋需旋緊，防止蒸發(fā)和微生物污染
底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或淺色調(diào)，若已變藍(lán)則不可使用；實(shí)驗(yàn)過(guò)程中需避免強(qiáng)光直接照射試劑和酶標(biāo)板
所有試劑使用前需充分混勻，建議使用微量振蕩器（低頻率），避免劇烈震蕩產(chǎn)生氣泡
標(biāo)準(zhǔn)品和樣本建議做雙孔檢測(cè)，取平均值計(jì)算結(jié)果，提高數(shù)據(jù)可靠性
實(shí)驗(yàn)中使用的試管、槍頭等耗材需一次性使用，避免交叉污染；檢測(cè)血液等標(biāo)本時(shí)，需嚴(yán)格遵守生物實(shí)驗(yàn)室安全防護(hù)條例
若樣本OD值高于標(biāo)準(zhǔn)曲線上限，需用樣本稀釋液適當(dāng)稀釋后重新檢測(cè)，最終結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)
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關(guān)鍵字： 大鼠磷酸化混合譜系激酶域樣蛋白;p-MLKL;elisa試劑盒;
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