丙酮酸脫羧酶（PDC）活性測定試劑盒說明書
微量法 100T/96S
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇發(fā)酵的關(guān)鍵酶之一，催化丙酮酸脫羧生成乙醛。
測定原理：
PDC催化丙酮酸脫羧生成乙醛，添加乙醇脫氫酶（ADH）來進(jìn)一步催化 NADH還原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+沒有；通過測定340 nm光吸收下降速率，來計算PDC活性。
自備儀器和用品：
研缽、冰、臺式離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、可調(diào)式移液槍
粗酶液提取：
1、細(xì)菌或細(xì)胞處理：收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照每200萬細(xì)菌或細(xì)胞加入400μl提取液，超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（功率200W，工作3s，間歇10s，工作35次），16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
2、組織處理：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿，16000g 4℃離心20min，取上清，置冰上待測。
3、血清（漿）樣品：直接檢測。
PDC測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于25℃水浴中預(yù)熱30min。
3. 空白管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl蒸餾水、20μl混合試劑、140μl試劑二和20μl試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A1和A2。
4. 測定管：依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl上清液、20μl混合試劑、140μl試劑二和20μl試劑六，迅速混勻后于340nm比色，記錄15s和75s的吸光值，分別記為A3和A4。
注意：空白管只需測定一次。
PDC活性計算：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(Cpr×V樣) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中，每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min /g 鮮重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按血清（漿）體積計算
活性單位定義：25℃中，每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。PDC (nmol/min /ml) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷V樣÷T
=1608×[(A3－A4)－(A1-A2)]
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：蛋白濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；W ：樣品質(zhì)量； T：反應(yīng)時間，1 min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中，每毫克蛋白每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/mg prot) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(Cpr×V樣) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中，每克組織每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min /g 鮮重) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(W×V樣÷V樣總) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷W
（3）按細(xì)胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中，每104個細(xì)胞每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。
PDC (nmol/min/104cell) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷(細(xì)胞數(shù)量×V樣÷V樣總) ÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]÷細(xì)胞數(shù)量
（4）按血清（漿）體積計算
活性單位定義：25℃中，每毫升血清（漿）每分鐘催化1nmol NADH 氧化為1個酶活單位。PDC (nmol/min /ml) ={[(A3－A4)－(A1-A2)]÷ε÷d×V總×109}÷V樣÷T
=3215×[(A3－A4)－(A1-A2)]
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5 cm；V總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml=2×10-4 L，V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，0.02ml；V樣總：提取液體積，1 ml；Cpr：蛋白濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量試劑盒；W ：樣品質(zhì)量； T：反應(yīng)時間，1 min。
關(guān)鍵字： 丙酮酸脫羧酶;丙酮酸脫羧酶（PDC）檢測試劑盒;
伊勢久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測、病理檢測和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬級的潔凈車間。我司堅持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場以來收到了客戶的廣泛好評。
公司秉承“ 摯誠科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅持以客戶為中心，致力于為中國的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。