3-磷酸甘油酸激酶（ PGK）試劑盒說(shuō)明書
微量法100T/96S
正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定
測(cè)定意義：
3-磷酸甘油酸激酶是糖酵解的關(guān)鍵酶，廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，催化1，3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油酸，產(chǎn)生1分子ATP，具有影響DNA復(fù)制和修補(bǔ)及刺激病毒RNA合成等生物學(xué)功能，廣泛應(yīng)用于藥物靶標(biāo)設(shè)計(jì)。
測(cè)定原理：
3-磷酸甘油酸激酶催化3-磷酸甘油酸和ATP產(chǎn)生1,3-二磷酸甘油酸和ADP，1,3-二磷酸甘油酸在3-磷酸甘油醛脫氫酶和NADH作用下產(chǎn)生3-磷酸甘油醛、NAD和磷酸，340nm處的吸光度變化反映了3-磷酸甘油酸激酶的活性的高低。
組成：
產(chǎn)品名稱 | PSS015-100T/96S | Storage |
提取液：液體 | 100ml×2 | 4℃ |
試劑一：液體 | 10ml | 4℃避光 |
試劑二：粉劑 | 1瓶 | -20℃避光 |
試劑三：粉劑 | 1瓶 | -20℃避光 |
試劑四：粉劑 | 1瓶 | -20℃避光 |
試劑五：粉劑 | 1瓶 | -20℃避光 |
說(shuō)明書 | 一份 |
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加2ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加1ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加1 ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑五：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加4 ml蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
自備儀器和用品：
天平、低溫離心機(jī)、研缽、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板。
酶液提取：
①總PGK酶提?。?/span>建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測(cè)定。
②胞漿和葉綠體PGK酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5～10的比例（建議稱取約0.1g樣本，加入1ml提取液），冰浴勻漿后于4℃，500g離心5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g離心10min，取上清用于測(cè)定胞漿PGK酶活性，取沉淀加1ml提取液，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎3s，間歇7s，總時(shí)間1min），然后4℃，500g離心5min，取上清測(cè)定葉綠體中PGK酶活性。
建議測(cè)定總PGK酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的PGK，則按照步驟②提取粗酶液。
測(cè)定操作：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
取微量石英比色皿/96孔板，依次加入100μl試劑一，20μl試劑二，10μl試劑三，10μl試劑四，40μl試劑五，20μl粗酶液，充分混勻，記錄340nm處10s的吸光值A(chǔ)1和310s的吸光值A(chǔ)2，△A=A1-A2
計(jì)算公式：
用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=321.54×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=321.54×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
用96孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下
（1）按照樣本蛋白濃度計(jì)算
酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK（nmol/min /mg prot）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(V樣×Cpr) ÷T=643.08×ΔA÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
PGK（nmol/min /g 鮮重）＝ΔA÷（ε×d）×V反總÷(W ×V樣÷V樣總) ÷T=643.08×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，0.2ml；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.02ml；V樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g
關(guān)鍵字： 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)測(cè)試盒;3-磷酸甘油酸激酶(PGK);
伊勢(shì)久（江蘇連云港）生物科技有限責(zé)任公司，成立于2019年，坐落于新亞歐大陸橋東方橋頭堡連云港市。公司由資深行業(yè)專家和雙一流高校博士聯(lián)合創(chuàng)辦，主要從事生化檢測(cè)、病理檢測(cè)和原料酶等相關(guān)試劑的研發(fā)和生產(chǎn)。
我司位于聯(lián)東U谷科技創(chuàng)新谷內(nèi)的2000平米的生產(chǎn)、研發(fā)基地已建成投入運(yùn)行，其中包括150平米的超十萬(wàn)級(jí)的潔凈車間。我司堅(jiān)持以自主研發(fā)為核心，現(xiàn)已生產(chǎn)出的脲酶、tRNA轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸、刀豆球蛋白、胰蛋白酶抑制劑等產(chǎn)品，熱銷市場(chǎng)以來(lái)收到了客戶的廣泛好評(píng)。
公司秉承“ 摯誠(chéng)科研、匠心傳承” 的發(fā)展理念，聚焦于前沿生物技術(shù)的應(yīng)用和創(chuàng)新，努力成為生物科技領(lǐng)域的標(biāo)桿企業(yè)。堅(jiān)持以客戶為中心，致力于為中國(guó)的科研工作者提供高品質(zhì)的產(chǎn)品和專業(yè)服務(wù)，始終是我們努力的目標(biāo)和方向。