超氧陰離子(Oxygen free radical, OFR)試劑盒說明書

                                                       微量法

正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定                                             

測(cè)定意義：

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用，但積累過多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用，導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。

測(cè)定原理：

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2－，NO2－在對(duì)氨基苯磺酸和α－萘胺的作用下，生成紅色的偶氮化合物，在530nm處有特征吸收峰，根據(jù)ΔA值可以計(jì)算樣品中O2－含量，反應(yīng)式為NH2OH + 2O2－ ＋H＋ → NO2－ ＋ H2O2 ＋ H2O。

自備儀器和用品：

天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、氯仿和蒸餾水。

超氧陰離子提取：

1、植物、動(dòng)物組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，然后，10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測(cè)。

2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；然后10000g，4℃，離心20min，取上清置于冰上待測(cè)。

3、血清或培養(yǎng)液：直接測(cè)定。

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