李斯特菌通用探針法qPCR試劑盒(不含內(nèi)參) 

產(chǎn)品及特點     
李斯特菌屬（Listeria spp.）屬乳桿菌目李斯特菌科，無芽孢、好氧或兼性厭氧細菌。在李斯特氏菌屬的七個種中，只有兩種致病菌：Listeria monocytogenes和Listeria ivanovii，Listeria monocytogenes和人類的李斯特氏菌癥相關。它廣泛分布于自然界中，在腐爛的植物、土壤、動物糞便、污水、青貯飼料和水中。病原感染可引起畏寒、發(fā)熱、頭痛、肌痛、關節(jié)痛、背痛、腹瀉、惡心、嘔吐等多種癥狀，嚴重的甚至會出現(xiàn)高熱、意識障礙和肢體癱瘓等。李斯特菌屬的傳播影響人類身體健康，因此快速檢測李斯特菌屬具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎開發(fā)的專門檢測李斯特菌通用的試劑盒，它有下列特點：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏度高，可以達到100拷貝/反應。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)李斯特菌DNA高度保守區(qū)設計，不會跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應，能檢測本屬的主要物種，包括L. monocytogenes、L. ivanovii、L. innocua、L. seeligeri、L. welshimeri、L. grayi、L. murrayi。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時線性范圍至少為5個數(shù)量級。

6. 本產(chǎn)品足夠50次20 μL體系的探針法熒光定量PCR反應。
7. 本產(chǎn)品只能用于科研。
規(guī)格及成分

稀釋標準曲線樣品

（以10E1-10E6拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1. 標記6個離心管，分別為6、5、4、3、2、1。

2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL 熒光PCR專用模板稀釋液，好用帶芯槍頭，下同）。

3. 在6號管中加入5 μL 1E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1E6拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E5拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在4號管中加入5 μL 1E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1E4拷貝/μL的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
樣品DNA的制備

7. 如果有N個樣品，好設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10 μL上步所得4號稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。
數(shù)據(jù)處理

1. 如果樣本制備陽性對照或PCR陽性對照(包括標曲樣本)結(jié)果為陰性，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重新樣本制備，重新進行PCR擴增或跟廠家聯(lián)系。如果樣本制備陰性對照或PCR陰性對照結(jié)果為陽性，說明環(huán)境污染，則整個實驗無效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系。

2. 如果陰性對照和陽性對照均正常，則實驗有效，可以進入后續(xù)分析。

3. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標準曲線。再以待測樣品的Ct值從標準曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。

4. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴增曲線，Ct值應該小于40，否則實驗無效。如果實驗有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。
自備試劑
樣品DNA。

運輸及保存
低溫運輸，-20℃保存，有效期2年。