細胞詳述
PBMC(peripheral blood mononuclear cell),外周血單個核細胞,顧名思義,其主要細胞類型為血液里邊具有單個核的細胞,主要包括淋巴細胞(T cell\B cell),單核細胞,巨噬細胞,樹突狀細胞和其他少量細胞類型。其中淋巴細胞占很大一部分。體外檢測淋巴細胞首先要分離外周血單個核細胞。
細胞特性
1)細胞來源于人外周血。
2)細胞鑒定:PBMC是混合體系,故無法進行純度鑒定,流式細胞儀檢測的細胞表型分布如下表:(圖表中為平均百分比,不同個體的表型分布有差異)
| 細胞表型 | 平均陽性百分比 |
| CD34 | 0.20% |
| CD3 | 70.70% |
| CD4 | 38.90% |
| CD8 | 24.50% |
| CD16 | 18.20% |
| CD19 | 10.60% |
| CD56 | 12.40% |
3)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
4)細胞生長方式:細胞是混合體系,少量貼壁生長,大部分懸浮生長。
產品的運輸和保存
1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中,置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸;收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng),如無法立刻進行復蘇操作,凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。
產品使用
1)本產品僅能用于科研
2)本產品未通過直接用于活體動物和人的審核
3)本產品未通過用于活體診斷的審核

細胞收到后處理:
細胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細胞運輸的最好辦法。收到細胞回到自己的實驗室后,先打開外包裝,用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內,嚴格無菌操作,培養(yǎng)箱靜置2-4小時。鏡下觀察:未超過80%匯合度時,可將瓶裝的完全培養(yǎng)液收集至離心管中,加入6ml完全培養(yǎng)基,放入37℃、5%CO2孵箱培養(yǎng);超過80%匯合度時,根據情況傳代或者凍存,具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。(注意發(fā)貨的是密封培養(yǎng)瓶的話,放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)記得培養(yǎng)瓶蓋子擰松)
細胞培養(yǎng)步驟:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入5mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加4-6mL完全培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入6cm皿中),培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
1、對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:
1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上含10%血清的完全培養(yǎng)基終止消化。
3.輕輕吹打細胞,完全脫落后吸出,在1000RPM條件下離心8-10分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 按5-6ml/瓶補加培養(yǎng)液,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培養(yǎng)液的新皿中或者瓶中。
PS:若客戶收到2ml小管細胞,收到細胞后,用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內,嚴格無菌操作;將小管細胞轉移至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿,加入5ml左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細胞密度:若密度未超過80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過80%,可直接進行傳代(方法同上)。
關鍵字: 人外周血單核細胞;ATCC細胞代購;ATCC細胞引種;上海細胞庫;雅吉細胞庫;
上海雅吉生物科技的核心業(yè)務主要圍繞生命科學研究所需的各類試劑、細胞、抗體及技術服務展開,具體可歸納為以下幾個方面:
細胞產品與技術平臺:
細胞產品:提供包括正常細胞、腫瘤細胞、腫瘤耐藥細胞在內的多種細胞系。同時,公司也是美國ScienCell等品牌的原代細胞產品的代理商。
穩(wěn)轉細胞株構建服務:公司具備豐富的蛋白表達研究經驗,能夠為客戶提供從基因序列到穩(wěn)定細胞株交付的一站式定制服務,應用于基因功能研究、藥物篩選和重組蛋白生產等領域。
科研試劑:這是公司的基礎和優(yōu)勢業(yè)務。產品線全面覆蓋了分子生物學、免疫學、細胞生物學和微生物學等多個學科。
ELISA試劑盒:提供人、大鼠、小鼠、犬、魚、雞、牛等多種物種以及植物的ELISA檢測試劑盒,在國內眾多重點實驗室中廣泛使用并被科研文獻引用。生化試劑、抗體與血清:提供包括一抗、二抗、單克隆/多克隆抗體在內的多種抗體產品,以及胎牛血清等細胞培養(yǎng)用血清。
蛋白研究相關試劑盒:提供超過300種針對不同樣本來源(動物、植物、微生物)和不同細胞器(如線粒體、外泌體)的蛋白提取及檢測試劑盒。