甲基轉(zhuǎn)移酶樣蛋白3抗體
原理特點(diǎn)
該抗體靶向METTL3蛋白,原理是特異性結(jié)合m6A甲基化核心酶METTL3抗原位點(diǎn),是RNA甲基化修飾的關(guān)鍵催化酶。產(chǎn)品特點(diǎn)為特異性強(qiáng)、靈敏度高,可精準(zhǔn)檢測METTL3表達(dá)及功能異常,適配RNA表觀遺傳、腫瘤增殖、分化調(diào)控研究。
英文名稱:METTL3 Rabbit pAb
中文名稱:甲基轉(zhuǎn)移酶樣蛋白3抗體

Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:IME4; Methyltransferase like protein 3; Methyltransferase-like protein 3; Methyltransferase like 3; METTL3; MT-A70; MTA70; MTA70_HUMAN; N6 adenosine methyltransferase 70 kDa subunit; N6-adenosine-methyltransferase 70 kDa subunit.
交叉反應(yīng):Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human METTL3
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量:64 kDa
濃度:1mg/ml
儲(chǔ)存液:0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件:Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng):This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
m?A甲基化核心:甲基轉(zhuǎn)移酶樣蛋白3(METTL3)是m?A甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物的催化亞基,參與mRNA、lncRNA等RNA的m?A甲基化修飾,調(diào)控基因表達(dá)、細(xì)胞增殖、分化和凋亡,維持細(xì)胞功能穩(wěn)態(tài),是表觀遺傳調(diào)控的關(guān)鍵分子。
疾病關(guān)聯(lián):METTL3在多種腫瘤中高表達(dá),通過調(diào)控m?A甲基化,促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲和耐藥性形成;在神經(jīng)退行性疾病中影響神經(jīng)元存活和功能,加劇疾病進(jìn)展,其表達(dá)水平與疾病狀態(tài)和不良預(yù)后相關(guān)。
研究應(yīng)用:METTL3抗體可用于檢測METTL3表達(dá)水平,研究m?A甲基化調(diào)控機(jī)制、疾病發(fā)病機(jī)???
核心實(shí)驗(yàn)操作方法
1. Western Blot(WB)
抗體孵育
一抗孵育:用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度(如1:1000),4℃搖床緩慢孵育過夜;或室溫孵育1-2小時(shí),孵育時(shí)保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌:用TBST緩沖液洗滌3次,每次5分鐘,洗去未結(jié)合的一抗;加入HRP標(biāo)記二抗(1:5000-1:10000稀釋),室溫孵育1小時(shí)。
顯影:再次洗滌后,加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘,用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像,根據(jù)信號(hào)強(qiáng)度調(diào)整曝光時(shí)間。
2. 免疫組化(IHC)
抗體孵育
一抗孵育:滴加稀釋后的一抗(如1:200)于組織切片上,置于濕盒中4℃孵育過夜;次日室溫復(fù)溫30分鐘,PBS沖洗3次,每次5分鐘。
二抗結(jié)合:加入生物素標(biāo)記二抗(1:200)室溫孵育30分鐘,PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物(1:100)室溫孵育30分鐘。
顯色封片:DAB顯色劑顯色3-10分鐘(顯微鏡下觀察控制時(shí)間),蘇木素復(fù)染1分鐘,梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光(IF)
抗體孵育
一抗孵育:用5% BSA稀釋抗體至工作濃度(如1:100),滴加在細(xì)胞爬片上,4℃避光孵育過夜;室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次,每次5分鐘。
二抗結(jié)合:加入熒光標(biāo)記二抗(如FITC標(biāo)記抗兔IgG,1:200),室溫避光孵育30-60分鐘;PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察:熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察,激發(fā)波長根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇(如FITC為488nm)。
4. ELISA實(shí)驗(yàn)
包被與孵育
包被:用包被緩沖液(pH9.6碳酸鹽緩沖液)稀釋抗原至1-10μg/ml,每孔加入100μl,4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育:棄去包被液,PBST洗滌3次,加入5% BSA封閉液200μl/孔,37℃孵育1小時(shí);加入稀釋后的一抗100μl/孔,37℃孵育1-2小時(shí)或4℃過夜。
檢測:洗滌后加入酶標(biāo)二抗(1:5000),37℃孵育1小時(shí);TMB底物溶液顯色10-30分鐘,2M硫酸終止反應(yīng)后,酶標(biāo)儀450nm波長讀取OD值。
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關(guān)鍵字: 甲基轉(zhuǎn)移酶樣蛋白3抗體;64 kDa;Rabbit;
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