產(chǎn)品屬性

產(chǎn)品名稱 | 磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1 | 貨號 | YS-K7217 |
英文名稱 | phospho-TAK1 (Ser192) Rabbit pAb | 用途 | 僅供科研實驗 |
商品介紹

產(chǎn)品應用:

Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:MAP3K7(phospho S192); TAK1(phospho Ser192); MAP3K7; Mitogen-activated protein kinase kinase kinase 7; Transforming growth factor-beta-activated kinase 1; TGF-beta-activated kinase 1; MAP3K 7; MAPKKK7; Mitogen activated protein kinase kinase kinase 7; TAK1; TGF beta activated kinase 1; TGF1a; Transforming growth factor beta activated kinase 1; M3K7_HUMAN; Map3k7; MEKK7; TGF-beta-activated kinase 1; TGF1a; Transforming growth factor-beta-activated kinase 1.
交叉反應:Human,Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human TAK1 around the phosphorylation site of Ser192
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量:67 kDa
濃度:1mg/ml
儲存液:0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件:Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項:This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
原理特點

該抗體特異性識別TAK1蛋白磷酸化活化位點,TAK1是TGF-β、炎癥信號通路的核心上游激酶,其磷酸化活化可啟動下游炎癥、纖維化、凋亡信號傳導。該抗體可精準檢測TAK1活化水平,評估炎癥與纖維化通路激活狀態(tài);同時可封閉其激酶活性中心,阻斷下游多條炎癥通路激活,抑制炎癥級聯(lián)反應與組織纖維化,助力研究慢性炎癥、器官纖維化機制。
靶點背景

靶點背景:TAK1 是 TGF-β、MAPK、NF-κB 上游樞紐激酶,磷酸化修飾為激活形式,串聯(lián)炎癥、纖維化、腫瘤、免疫多條信號軸。
作用機制:針對活化型磷酸化位點制備抗體,只結(jié)合磷酸化激活 TAK1,區(qū)分靜息未修飾總 TAK1 蛋白。
產(chǎn)品特點:多平臺兼容,可檢測組織、細胞、上清樣本;常用于肝腎纖維化、自身免疫炎癥、腫瘤免疫微環(huán)境、抗感染通路研究。
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樣本處理與實驗操作

1. Western Blot(免疫印跡)
樣本制備
細胞樣本:PBS洗滌2-3次,加入RIPA裂解液(含1% PMSF和磷酸酶抑制劑),冰上裂解30分鐘,12000rpm離心15分鐘取上清,BCA法定量蛋白濃度
組織樣本:液氮研磨成粉末,加入裂解液冰上裂解,離心后取上清,調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理:加入5×SDS上樣緩沖液,95℃加熱5-10分鐘,冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后,用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時
一抗稀釋后4℃孵育過夜(12-16小時),或室溫孵育1-2小時;孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次,每次5分鐘;加入二抗(1:5000-1:10000稀釋)室溫孵育1-2小時
再次洗滌后,用ECL發(fā)光液顯影,通過凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P(石蠟切片免疫組化)
樣本前處理
脫蠟水化:依次放入二甲苯(2次,每次10分鐘)、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇(各5分鐘),最后用PBS沖洗
抗原修復:將切片放入檸檬酸鹽緩沖液(pH6.0)中,微波爐加熱至沸騰,保持10-15分鐘,自然冷卻至室溫
封閉處理:3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過氧化物酶,PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上,4℃孵育過夜;孵育時置于濕盒中,防止液體揮發(fā)
次日室溫復溫30分鐘,PBS沖洗3次,每次5分鐘;加入二抗(生物素標記)室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后,加入ABC復合物室溫孵育30分鐘,DAB顯色劑顯色(顯微鏡下觀察控制時間,通常3-10分鐘),蘇木素復染后脫水封片
3. ICC/IF(細胞免疫熒光)
樣本制備
細胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度,PBS洗滌2次,4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理(根據(jù)抗體類型選擇):0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘,PBS沖洗3次
封閉處理:5% BSA室溫封閉30-60分鐘,減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上,4℃孵育過夜,或室溫孵育1-2小時
PBS沖洗3次,每次5分鐘;加入熒光標記二抗(1:200-1:500稀釋),室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后,用抗淬滅封片液封片,熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA(酶聯(lián)免疫吸附試驗)
包被與封閉
用包被緩沖液(如碳酸鹽緩沖液pH9.6)稀釋抗原至合適濃度,每孔加入100μl,4℃包被過夜
棄去包被液,PBST洗滌3次,每次3分鐘;加入封閉液(5% BSA)每孔200μl,37℃孵育1-2小時
抗體孵育
一抗按比例稀釋后,每孔加入100μl,37℃孵育1-2小時,或4℃孵育過夜
PBST洗滌3次,加入稀釋好的酶標二抗,每孔100μl,37℃孵育1小時
洗滌后加入底物溶液(如TMB)每孔100μl,37℃避光顯色10-20分鐘,加入終止液(2M H?SO?),用酶標儀在450nm波長讀取OD值
關(guān)鍵字: 磷酸化轉(zhuǎn)化生長因子β活化激酶1;67 kDa;Rabbit;
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