產(chǎn)品屬性
產(chǎn)品名稱 | 磷酸化組蛋白H2AX抗體 | 貨號 | YS-K7219 |
英文名稱 | phospho-H2AX (Ser139) Rabbit pAb | 用途 | 僅供科研實驗 |
商品介紹
產(chǎn)品應(yīng)用:
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:phospho-Histone H2A.X(Ser140); H2AX_HUMAN; 2A.X variant histone; H2A.X; H2A/X; H2AFX; Histone H2AX;
交叉反應(yīng):Human,Mouse,Rat
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human Histone H2AX around the phosphorylation site of Tyr139
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：16 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
原理特點
該抗體特異性識別磷酸化組蛋白H2AX（γ-H2AX），H2AX磷酸化是DNA雙鏈斷裂的標(biāo)志性修飾，可啟動DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期阻滯與凋亡信號。該抗體可精準(zhǔn)檢測細(xì)胞DNA損傷程度，定位損傷位點；同時可封閉磷酸化修飾位點，干擾DNA損傷修復(fù)信號傳導(dǎo)，抑制細(xì)胞損傷修復(fù)能力，助力研究基因組損傷、腫瘤放化療敏感性、細(xì)胞衰老機(jī)制。
靶點背景
靶點背景：DNA 雙鏈斷裂（DSB）時，H2AX 快速在 Ser139 位點磷酸化生成 γ-H2AX，是 DNA 損傷最經(jīng)典標(biāo)志物，輻射、化療藥、氧化損傷均可誘導(dǎo)。
作用機(jī)制：抗體專一結(jié)合 Ser139 磷酸化表位，無未磷酸化 H2AX 交叉反應(yīng)，可標(biāo)記 DNA 損傷灶點。
產(chǎn)品特點：IF 可見清晰損傷灶熒光斑點，靈敏度極高；廣泛用于放化療藥效、基因毒性檢測、衰老、腫瘤 DNA 修復(fù)缺陷研究。
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核心實驗操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時，孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標(biāo)記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學(xué)發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號強(qiáng)度調(diào)整曝光時間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標(biāo)記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復(fù)合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時間），蘇木素復(fù)染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細(xì)胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復(fù)溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標(biāo)記二抗（如FITC標(biāo)記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標(biāo)記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實驗
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。
檢測：洗滌后加入酶標(biāo)二抗（1:5000），37℃孵育1小時；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應(yīng)后，酶標(biāo)儀450nm波長讀取OD值。
關(guān)鍵字： 磷酸化組蛋白H2AX抗體;16 kDa;Rabbit;
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