產(chǎn)品屬性
產(chǎn)品名稱 | 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶抗體 | 貨號(hào) | YS-K7263 |
英文名稱 | EphA2 Rabbit pAb | 用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
商品介紹
產(chǎn)品應(yīng)用:
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:ARCC2; Eck; Eph receptor A2 antibody EphA2; Ephrin receptor; Ephrin receptor EphA2; Ephrin type A receptor 2; Epithelial cell kinase; Epithelial cell receptor protein tyrosine kinase antibody Myk 2; Myk2; Sek 2; Sek2; Tyrosine protein kinase receptor ECK; Tyrosine-protein kinase receptor MPK-5; Tyrosine-protein kinase receptor SEK-2; EPHA2_HUMAN.
交叉反應(yīng):Human,Rat
抗體來(lái)源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated synthetic peptide derived from human EphA2
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：105 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
原理特點(diǎn)
該抗體特異性結(jié)合內(nèi)皮細(xì)胞受體酪氨酸激酶，該激酶調(diào)控內(nèi)皮細(xì)胞增殖、血管新生、血管成熟與穩(wěn)態(tài)維持。該抗體可檢測(cè)激酶表達(dá)與活化水平，評(píng)估血管新生能力；同時(shí)可封閉激酶活性位點(diǎn)，抑制下游血管生成信號(hào)，阻斷內(nèi)皮異常增殖與血管新生，助力研究腫瘤血管生成、血管畸形機(jī)制。
靶點(diǎn)背景
靶點(diǎn)背景：Tie2 是內(nèi)皮特異性酪氨酸激酶受體，結(jié)合血管生成素 Ang1/Ang2，調(diào)控血管成熟、內(nèi)皮存活、血管重塑、腫瘤脈管形成。
抗體作用原理：靶向 Tie2 胞外配體結(jié)合區(qū)或胞內(nèi)激酶結(jié)構(gòu)域，特異性識(shí)別全長(zhǎng)膜型 Tie2，區(qū)分無(wú)關(guān)酪氨酸激酶受體（VEGFR、EGFR 等）。
產(chǎn)品特點(diǎn)：可 WB 定量蛋白水平、流式標(biāo)記內(nèi)皮細(xì)胞；用于缺血修復(fù)、腫瘤血管、眼底血管病變、胚胎血管發(fā)育實(shí)驗(yàn)。
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樣本處理與實(shí)驗(yàn)操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)
一抗稀釋后4℃孵育過(guò)夜（12-16小時(shí)），或室溫孵育1-2小時(shí)；孵育時(shí)保證膜完全浸沒(méi)在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋）室溫孵育1-2小時(shí)
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過(guò)夜；孵育時(shí)置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時(shí)間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）
樣本制備
細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過(guò)夜，或室溫孵育1-2小時(shí)
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋），室溫避光孵育30-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過(guò)夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時(shí)
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時(shí)，或4℃孵育過(guò)夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時(shí)
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀取OD值
關(guān)鍵字： 內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪氨酸激酶抗體;105 kDa;Rabbit;
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