磷酸化細胞信號轉(zhuǎn)導分子Smad-1/5抗體
原理特點
該抗體可特異性識別Smad1、Smad5蛋白的保守磷酸化修飾位點，靶向結(jié)合活化態(tài)Smad1/5蛋白。Smad1/5是BMP信號通路核心下游分子，磷酸化修飾是其活化、核轉(zhuǎn)位、調(diào)控骨分化、細胞增殖與胚胎發(fā)育的關(guān)鍵，該抗體可同步檢測兩種蛋白的磷酸化活化水平，評估BMP通路活性；同時可封閉磷酸化功能位點，阻斷Smad1/5介導的下游基因轉(zhuǎn)錄，干擾骨代謝、細胞分化進程，適用于骨發(fā)育異常、組織修復、腫瘤分化機制研究。
英文名稱:phospho-Smad1/5 (Ser463 + Ser465) Rabbit pAb
中文名稱:磷酸化細胞信號轉(zhuǎn)導分子Smad-1/5抗體
Not yet tested in other applications.
Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:Smad1(phospho S463/465); Smad1(phospho Ser463/465); p-Smad1(Ser463/465); Mothers against decapentaplegic homolog 1; BSP 1; BSP1; BSP-1; Dwarfin A; DwfA; hSMAD 1; hSMAD1; JV 41; JV4 1; JV4-1; JV41; MAD mothers against decapentaplegic homolog 1; Mad related protein 1; MADH 1; MADH1; Madr 1; MADR1; Mothers against decapentaplegic homolog 1; Mothers against DPP homolog 1; Sma and Mad related protein 1; SMAD 1; SMAD-1; SMAD family member 1; SMAD mothers against DPP homolog 1 Drosophila; Spinal muscular atrophy distal with upper limb predominance; TGF beta signaling protein 1; Transforming growth factor beta signaling protein 1; SMAD1_HUMAN; MAD homolog 1; Mothers against DPP homolog 1; Mad-related protein 1; SMAD family member 1; Smad1; Transforming growth factor-beta-signaling protein 1.
交叉反應:Human,Mouse,Rat,Pig
抗體來源:Rabbit
免疫原:KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human Smad1/5 around the phosphorylation site of Ser463/465
亞型:IgG
性狀:Liquid
純化方法:affinity purified by Protein A
克隆類型:Polyclonal
理論分子量：52 kDa
濃度：1mg/ml
儲存液：0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點背景
靶點背景：Smad1/5 是 BMP 通路受體調(diào)控型分子，BMP 受體介導 C 端磷酸化后入核，調(diào)控成骨、分化、胚胎發(fā)育。
抗體原理：Smad1/5 同源磷酸化位點肽，同步識別兩種活化蛋白，不結(jié)合 Smad2/3。
產(chǎn)品特點：成骨細胞、軟骨組織標配，用于骨質(zhì)疏松、骨修復、干細胞成骨分化實驗。
核心實驗操作方法
1. Western Blot（WB）
抗體孵育
一抗孵育：用5%脫脂牛奶或BSA稀釋抗體至推薦濃度（如1:1000），4℃搖床緩慢孵育過夜；或室溫孵育1-2小時，孵育時保證膜完全浸沒在抗體溶液中。
洗滌：用TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘，洗去未結(jié)合的一抗；加入HRP標記二抗（1:5000-1:10000稀釋），室溫孵育1小時。
顯影：再次洗滌后，加入ECL發(fā)光液孵育1-2分鐘，用化學發(fā)光成像儀采集圖像，根據(jù)信號強度調(diào)整曝光時間。
2. 免疫組化（IHC）
抗體孵育
一抗孵育：滴加稀釋后的一抗（如1:200）于組織切片上，置于濕盒中4℃孵育過夜；次日室溫復溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入生物素標記二抗（1:200）室溫孵育30分鐘，PBS沖洗后加入ABC復合物（1:100）室溫孵育30分鐘。
顯色封片：DAB顯色劑顯色3-10分鐘（顯微鏡下觀察控制時間），蘇木素復染1分鐘，梯度乙醇脫水后中性樹膠封片。
3. 免疫熒光（IF）
抗體孵育
一抗孵育：用5% BSA稀釋抗體至工作濃度（如1:100），滴加在細胞爬片上，4℃避光孵育過夜；室溫復溫后PBS沖洗3次，每次5分鐘。
二抗結(jié)合：加入熒光標記二抗（如FITC標記抗兔IgG，1:200），室溫避光孵育30-60分鐘；PBS沖洗后用抗淬滅封片液封片。
觀察：熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察，激發(fā)波長根據(jù)二抗標記物選擇（如FITC為488nm）。
4. ELISA實驗
包被與孵育
包被：用包被緩沖液（pH9.6碳酸鹽緩沖液）稀釋抗原至1-10μg/ml，每孔加入100μl，4℃過夜孵育。
封閉與一抗孵育：棄去包被液，PBST洗滌3次，加入5% BSA封閉液200μl/孔，37℃孵育1小時；加入稀釋后的一抗100μl/孔，37℃孵育1-2小時或4℃過夜。
檢測：洗滌后加入酶標二抗（1:5000），37℃孵育1小時；TMB底物溶液顯色10-30分鐘，2M硫酸終止反應后，酶標儀450nm波長讀取OD值。
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關(guān)鍵字： 磷酸化細胞信號轉(zhuǎn)導分子Smad-1/5抗;52 kDa;Rabbit;
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