磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3單克隆抗體
原理特點(diǎn)
該單克隆抗體可高特異性、高親和力識(shí)別STAT3蛋白磷酸化活化位點(diǎn)，精準(zhǔn)靶向激活態(tài)STAT3蛋白，無(wú)交叉反應(yīng)。STAT3磷酸化是其活化、核轉(zhuǎn)位、調(diào)控炎癥、腫瘤增殖、免疫抑制的核心標(biāo)志，該抗體可高靈敏度檢測(cè)STAT3磷酸化水平，精準(zhǔn)量化JAK-STAT3通路活性；同時(shí)可強(qiáng)效封閉磷酸化活性位點(diǎn)，阻斷下游增殖、炎癥信號(hào)傳導(dǎo)，高效抑制腫瘤細(xì)胞活化與炎癥進(jìn)展，適用于高精度定量檢測(cè)與靶向干預(yù)研究。
英文名稱(chēng):phospho-STAT3 (Tyr705) Mouse mAb
中文名稱(chēng):磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3單克隆抗體
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Optimal working dilutions must be determined by the end user.
英文別名:STAT3(phospho Y705); p-STAT3(phospho Y705); phospho-Stat3(pTyr705); STAT3(phospho-Tyr705); p-STAT3(Tyr705); phosphorylated Stat3(pTyr705); p-Stat3; Acute Phase Response Factor; APRF; DNA binding protein APRF; FLJ20882; MGC16063; Signal Transductor and Activator of Transcription 3; STAT 3; STAT3_HUMAN.
交叉反應(yīng):Human,Rat
抗體來(lái)源:Mouse
免疫原:KLH conjugated Synthesised phosphopeptide derived from human STAT3 around the phosphorylation site of Tyr705
亞型:IgG
性狀:Size : 50ul/100ul/200ul <br/> Liquid<br/><br/>Size : 200ug (PBS only) <br/> Lyophilized<br/> Note: Centrifuge tubes before opening. Reconstitute the lyophilized product in distilled water. Optimal concentration should be determined by the end user.
純化方法:affinity purified by Protein G
克隆類(lèi)型:Monoclonal
克隆號(hào)：3F10
理論分子量：88 kDa
濃度：1mg/ml
儲(chǔ)存液：Size : 50ul/100ul/200ul<br/>0.01M TBS (pH7.4) with 1% BSA, 0.02% Proclin300 and 50% Glycerol.Size : 200ug (PBS only)<br/>0.01M PBS
保存條件：Shipped at 4℃. Store at -20℃ for one year. Avoid repeated freeze/thaw cycles.
注意事項(xiàng)：This product as supplied is intended for research use only, not for use in human, therapeutic or diagnostic applications.
靶點(diǎn)背景
靶點(diǎn)背景：STAT3 酪氨酸磷酸化激活，驅(qū)動(dòng)腫瘤增殖、免疫抑制、炎癥、干細(xì)胞穩(wěn)態(tài)，是腫瘤明星靶點(diǎn)。
抗體原理：雜交瘤技術(shù)制備單克隆，靶向 STAT3 經(jīng)典 Y705 活化磷酸位點(diǎn)。
產(chǎn)品特點(diǎn)：?jiǎn)慰寺√禺愋詮?qiáng)、條帶干凈，適合高通量腫瘤病理切片批量篩查。
樣本處理與實(shí)驗(yàn)操作
1. Western Blot（免疫印跡）
樣本制備
細(xì)胞樣本：PBS洗滌2-3次，加入RIPA裂解液（含1% PMSF和磷酸酶抑制劑），冰上裂解30分鐘，12000rpm離心15分鐘取上清，BCA法定量蛋白濃度
組織樣本：液氮研磨成粉末，加入裂解液冰上裂解，離心后取上清，調(diào)整蛋白濃度至一致
變性處理：加入5×SDS上樣緩沖液，95℃加熱5-10分鐘，冷卻后上樣
抗體孵育
轉(zhuǎn)膜完成后，用5% BSA或牛奶封閉液室溫封閉1-2小時(shí)
一抗稀釋后4℃孵育過(guò)夜（12-16小時(shí)），或室溫孵育1-2小時(shí)；孵育時(shí)保證膜完全浸沒(méi)在抗體溶液中
TBST緩沖液洗滌3次，每次5分鐘；加入二抗（1:5000-1:10000稀釋?zhuān)┦覝胤跤?-2小時(shí)
再次洗滌后，用ECL發(fā)光液顯影，通過(guò)凝膠成像系統(tǒng)采集圖像
2. IHC-P（石蠟切片免疫組化）
樣本前處理
脫蠟水化：依次放入二甲苯（2次，每次10分鐘）、無(wú)水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各5分鐘），最后用PBS沖洗
抗原修復(fù)：將切片放入檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）中，微波爐加熱至沸騰，保持10-15分鐘，自然冷卻至室溫
封閉處理：3% H?O?室溫孵育10分鐘滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，PBS沖洗后用10%山羊血清封閉30分鐘
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在切片上，4℃孵育過(guò)夜；孵育時(shí)置于濕盒中，防止液體揮發(fā)
次日室溫復(fù)溫30分鐘，PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入二抗（生物素標(biāo)記）室溫孵育30分鐘
PBS沖洗后，加入ABC復(fù)合物室溫孵育30分鐘，DAB顯色劑顯色（顯微鏡下觀察控制時(shí)間，通常3-10分鐘），蘇木素復(fù)染后脫水封片
3. ICC/IF（細(xì)胞免疫熒光）
樣本制備
細(xì)胞爬片培養(yǎng)至70-80%匯合度，PBS洗滌2次，4%多聚甲醛固定15-20分鐘
通透處理（根據(jù)抗體類(lèi)型選擇）：0.1% Triton X-100室溫孵育10分鐘，PBS沖洗3次
封閉處理：5% BSA室溫封閉30-60分鐘，減少非特異性結(jié)合
抗體孵育
一抗稀釋后滴加在爬片上，4℃孵育過(guò)夜，或室溫孵育1-2小時(shí)
PBS沖洗3次，每次5分鐘；加入熒光標(biāo)記二抗（1:200-1:500稀釋?zhuān)?，室溫避光孵?0-60分鐘
再次沖洗后，用抗淬滅封片液封片，熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡下觀察采集圖像
4. ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)）
包被與封閉
用包被緩沖液（如碳酸鹽緩沖液pH9.6）稀釋抗原至合適濃度，每孔加入100μl，4℃包被過(guò)夜
棄去包被液，PBST洗滌3次，每次3分鐘；加入封閉液（5% BSA）每孔200μl，37℃孵育1-2小時(shí)
抗體孵育
一抗按比例稀釋后，每孔加入100μl，37℃孵育1-2小時(shí)，或4℃孵育過(guò)夜
PBST洗滌3次，加入稀釋好的酶標(biāo)二抗，每孔100μl，37℃孵育1小時(shí)
洗滌后加入底物溶液（如TMB）每孔100μl，37℃避光顯色10-20分鐘，加入終止液（2M H?SO?），用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)讀取OD值
公司正在出售的產(chǎn)品
細(xì)胞表面趨化因子受體4抗體 | PE標(biāo)記的兔抗人IgG H&L | MSY2/YBOX2/DBPC Antibody Blocking Peptide |
原ai基因酪氨酸蛋白激酶Yes1抗體 | Alexa Fluor 488標(biāo)記的兔抗雞IgM | EHBP1L1 Antibody Blocking Peptide |
跨膜蛋白6超家族成員1抗體 | 膠體金標(biāo)記的小鼠抗豚鼠IgG H&L | TAAR5 Antibody Blocking Peptide |
G蛋白偶合受體激酶1抗體 | Alexa Fluor 350標(biāo)記的小鼠抗人IgM | GRID2 Antibody Blocking Peptide |
磷酸化活化復(fù)制因子2抗體 | PE-CY5標(biāo)記的小鼠抗羊IgG H&L | APAF-1 Antibody Blocking Peptide |
p53調(diào)節(jié)凋亡誘導(dǎo)蛋白1抗體 | Alexa Fluor 680標(biāo)記的羊抗雞IgG H&L | Iba-1/ AIF-1 Antibody Blocking Peptide |
脂肪水解酶LIPJ抗體 | 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3單克隆抗體FITC標(biāo)記的(ab)2片段羊抗小鼠IgG H&L | phospho-MEK1/MAP2K1 (Thr386) Antibody Blocking Peptide |
磷酸化非受體型蛋白酪氨酸磷酸酶7抗體 | 堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的兔抗小鼠k鏈 | FSTL5 Antibody Blocking Peptide |
鋅指蛋白124抗體 | 生物素標(biāo)記的兔抗狗IgG H&L | phospho-STAT5a (Tyr694) Antibody Blocking Peptide |
關(guān)鍵字： 磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3單克隆抗體;Mouse;88 kDa;
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