HIV-1/HIV-2雙重探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法
一、DNA 提取(樣本制備區(qū))
用自選方法提取純化樣品 DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)核酸提取試劑盒兼容。
二、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(樣本制備區(qū))
（由于陽性對照濃度高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，避免污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標(biāo)記 6 個(gè)離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光模板稀釋液，（最好用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1.00E+08 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1.00E+07 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1.00E+07 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1.00E+06 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1.00E+06 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1.00E+05 拷貝/μL 的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作直到得到 6 個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。若無需制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，只做定性檢測，將陽性對照稀釋到 1.00E+05 拷貝/μL 即可。
HIV-1/HIV-2雙重探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)果分析
1. 質(zhì)量控制，以下條件有一條不滿足時(shí)，結(jié)果視為無效：
(a)空白對照：無 FAM/HEX 熒光信號檢出；
(b)陰性對照：無 FAM 熒光信號檢出，有 HEX 熒光信號檢出，且 HEX 通道 Ct 值≤30.0；
(c)陽性對照(1.00E+05 拷貝/μL)：有 FAM/HEX 熒光信號檢出，且 Ct 值均≤30.0。
2. 如果制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，則以陽性對照濃度的 log 值為橫軸，以 Ct 值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的 Ct 值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品 DNA 濃度的 log 值，推算出其濃度。
3. 如果未制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照如下標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果：
樣本檢測結(jié)果：FAM/HEX 通道的均 Ct 值≤38，有明顯指數(shù)增長，結(jié)果為陽性；FAM 通道 Ct 值≥40 或無 Ct 值，且 HEX 通道 Ct 值≤38，結(jié)果為陰性；FAM 通道 Ct 值在38-40 范圍，且 HEX 通道 Ct 值≤38，應(yīng)對樣本進(jìn)行復(fù)檢，如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 Ct 值仍在 38-40 范圍，有明顯指數(shù)增長，則判定為陽性，否則為陰性；HEX 通道 Ct 值＞38.0 或無擴(kuò)增曲線，則需重新取樣檢測。
HIV-1/HIV-2雙重探針法熒光定量PCR試劑盒