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甲型流感病毒探針法法熒光定量RT-PCR試劑盒,它具有下列特點(diǎn):
1.即開即用,用戶只需要提供樣品核酸模板。
2.引物和探針經(jīng)過優(yōu)化,分析靈敏性高。
3.提供陽性對(duì)照,便于區(qū)分假陰性樣品。
4.特異性高,引物是根據(jù)高度保守區(qū)設(shè)計(jì),不會(huì)跟其他病毒的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。
5.既可用于定性檢測(cè),又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。
6.本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量RT-PCR反應(yīng)。

探針法的如下:
一、稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品(以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例)。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原,本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對(duì)照,只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對(duì)照。
1.標(biāo)記6個(gè)離心管,分別為6,5,4,3,2,1。
2.用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光RT-PCR專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同。
3.在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對(duì)照(試劑盒提供),充分震蕩1分鐘,得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4.換槍頭,在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5.換槍頭,在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對(duì)照(上步稀釋所得),充分震蕩1分鐘,得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6.重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品RNA的制備
7.如果有N個(gè)樣品,最好設(shè)置N+2個(gè)提取,多出的是PC(樣品制備陽性對(duì)照)和NC(樣品制備陰性對(duì)照)??梢匀£栃詫?duì)照的1000倍稀釋液10μL再加上一定量的水,使總體積與待提取樣品的規(guī)定體積一致,以此作為PC。另外用水作為NC。
8.用自選方法純化樣品的RNA,本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)病毒RNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的柱式病毒RNAout或免提取核酸釋放劑。
三、Probe qRT-PCR反應(yīng)(20μL體系,在樣品制備室進(jìn)行)
9.如果做定量分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+9個(gè)RT-PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于RT-PCR陰性對(duì)照(用水做模板),6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù),則標(biāo)記N+4個(gè)RT-PCR管,其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品,1個(gè)用于RT-PCR陰性對(duì)照(用水做模板),1個(gè)用于RT-PCR陽性對(duì)照(用第4號(hào)管的陽性對(duì)照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。在標(biāo)記管中按下表加入各成分(本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽性對(duì)照,并且陽性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后最后加):(詳見隨貨說明書或向客服咨詢)
數(shù)據(jù)處理
12.如果把本試劑盒用于定量檢測(cè),則以陽性對(duì)照濃度的log值為橫軸,以Ct值為縱軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測(cè)樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值,再推算出其濃度。
如果把本試劑盒用于定性檢測(cè),只判斷陽性或陰性,則陰性對(duì)照Ct必須大于或等于40。陽性對(duì)照必須有熒光對(duì)數(shù)增長,有典型擴(kuò)增曲線,Ct值應(yīng)該小于或等于36。對(duì)待測(cè)樣品,如果其Ct大于或等于40則為陰性,如果小于或等于36則為陽性。如果在36-40之間,則重復(fù)一次。重復(fù)實(shí)驗(yàn)的Ct值如果大于或等于40則為陰性,如果小于40,則為陽性。
甲型流感病毒探針法法熒光定量RT-PCR試劑盒注意事項(xiàng):
1所有操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行
2試劑盒內(nèi)各種組分使用前應(yīng)自然融化,混勻并短暫離心;
3 反應(yīng)液應(yīng)避光保存;
4反應(yīng)中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;
5使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)專用工作服;
6 樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進(jìn)行,以免交叉污染;
7 實(shí)驗(yàn)完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺(tái)和移液器;
歡迎新老客戶咨詢?cè)摦a(chǎn)品及相關(guān)試劑:甲型流感病毒探針法法熒光定量RT-PCR試劑盒
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上海雅吉生物科技的核心業(yè)務(wù)主要圍繞生命科學(xué)研究所需的各類試劑、細(xì)胞、抗體及技術(shù)服務(wù)展開,具體可歸納為以下幾個(gè)方面:
細(xì)胞產(chǎn)品與技術(shù)平臺(tái):
細(xì)胞產(chǎn)品:提供包括正常細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、腫瘤耐藥細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞系。同時(shí),公司也是美國ScienCell等品牌的原代細(xì)胞產(chǎn)品的代理商。
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù):公司具備豐富的蛋白表達(dá)研究經(jīng)驗(yàn),能夠?yàn)榭蛻籼峁幕蛐蛄械椒€(wěn)定細(xì)胞株交付的一站式定制服務(wù),應(yīng)用于基因功能研究、藥物篩選和重組蛋白生產(chǎn)等領(lǐng)域。
科研試劑:這是公司的基礎(chǔ)和優(yōu)勢(shì)業(yè)務(wù)。產(chǎn)品線全面覆蓋了分子生物學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和微生物學(xué)等多個(gè)學(xué)科。
ELISA試劑盒:提供人、大鼠、小鼠、犬、魚、雞、牛等多種物種以及植物的ELISA檢測(cè)試劑盒,在國內(nèi)眾多重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室中廣泛使用并被科研文獻(xiàn)引用。生化試劑、抗體與血清:提供包括一抗、二抗、單克隆/多克隆抗體在內(nèi)的多種抗體產(chǎn)品,以及胎牛血清等細(xì)胞培養(yǎng)用血清。
蛋白研究相關(guān)試劑盒:提供超過300種針對(duì)不同樣本來源(動(dòng)物、植物、微生物)和不同細(xì)胞器(如線粒體、外泌體)的蛋白提取及檢測(cè)試劑盒。