異丙基-beta-D-硫代半乳糖吡喃糖苷,通常簡(jiǎn)稱為IPTG(CAS號(hào) 367-93-1),是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中極其重要的一種試劑。它的核心用途是作為乳糖操縱子的誘導(dǎo)劑,用于誘導(dǎo)外源蛋白在大腸桿菌中表達(dá)。
核心用途
IPTG之所以被廣泛應(yīng)用,源于其獨(dú)特的作用機(jī)制:它是一種不被細(xì)菌代謝的乳糖類似物,能持續(xù)與lac阻遏蛋白結(jié)
合,解除其對(duì)目的基因轉(zhuǎn)錄的抑制,從而穩(wěn)定地誘導(dǎo)蛋白表達(dá)。具體應(yīng)用包括:
誘導(dǎo)蛋白表達(dá):這是其最重要的用途。在帶有Lac、Tac、T7、Trc等啟動(dòng)子的表達(dá)系統(tǒng)中,IPTG被用來(lái)高效誘導(dǎo)
目的重組蛋白的表達(dá)。
藍(lán)白斑篩選:在克隆實(shí)驗(yàn)中,與顯色底物X-Gal聯(lián)合使用,用于區(qū)分含有重組質(zhì)粒的菌落(白色)和空載體菌落
(藍(lán)色),是基因克隆中一種經(jīng)典的篩選方法。
在實(shí)驗(yàn)操作中,通常將IPTG配制成無(wú)菌水溶液(如1M或0.8M儲(chǔ)液),過(guò)濾除菌后于-20°C保存,使用時(shí)按需稀
釋。
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