大鼠甲基丙二酰輔酶A異構(gòu)酶(MCEE)重組蛋白可開(kāi)展支鏈氨基酸代謝通路分析、有機(jī)酸代謝缺陷疾病、酶活性定量及突變體功能驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)。
型號(hào)：YS-DB2535
產(chǎn)品名稱(chēng)：大鼠甲基丙二酰輔酶A異構(gòu)酶(MCEE)重組蛋白
物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
英文名稱(chēng)：Recombinant Methylmalonyl Coenzyme A Epimerase (MCEE)
GLOD2; Glyoxalase Domain Containing 2; DL-methylmalonyl-CoA racemase
酶與激酶
物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
來(lái)源：原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測(cè)定)
亞細(xì)胞定位：：線(xiàn)粒體
預(yù)測(cè)分子量：18.7kDa
實(shí)際分子量：18kDa(差異分析請(qǐng)參閱說(shuō)明書(shū))
片段與標(biāo)簽：Gln39~Ala178 with N-terminal His Tag
緩沖液成份：20mM Tris, 150mM NaCl緩沖液（pH8.0, 含有1mM EDTA, 1mM DTT, 0.01% SKL, 5% Trehalose和Proclin300）
性狀：凍干粉
純度：> 97%
等電點(diǎn)：6.7
應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測(cè)原理：
SDS-PAGE 純度分析：變性電泳分離蛋白，染色分析主條帶純度、降解片段含量。
BCA 蛋白定量：蛋白介導(dǎo)銅離子還原顯色，吸光度換算重組蛋白濃度。
WB 特異性鑒定：MCEE 特異性抗體抗原特異性結(jié)合，驗(yàn)證重組蛋白表達(dá)正確。
輔酶 A 底物異構(gòu)酶活檢測(cè)：催化甲基丙二酰輔酶 A 構(gòu)型異構(gòu)轉(zhuǎn)化，檢測(cè)底物轉(zhuǎn)化率表征異構(gòu)酶活性。
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常見(jiàn)實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景操作指南：
細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)
濃度優(yōu)化：先設(shè)置預(yù)實(shí)驗(yàn)梯度（如0.1ng/mL、1ng/mL、10ng/mL、100ng/mL），檢測(cè)細(xì)胞增殖、分化或信號(hào)通路激活情況，確定最優(yōu)工作濃度。
添加時(shí)機(jī)：細(xì)胞接種后24-48小時(shí)，待細(xì)胞貼壁且狀態(tài)穩(wěn)定時(shí)添加重組蛋白。
更換培養(yǎng)基：若蛋白半衰期較短，需每隔24-48小時(shí)更換含新鮮蛋白的培養(yǎng)基。
免疫檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
陽(yáng)性對(duì)照設(shè)置：在ELISA或WB實(shí)驗(yàn)中，用已知濃度的重組蛋白制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，確保定量準(zhǔn)確性。
封閉處理：若蛋白用于包被ELISA板，包被后需用5%脫脂牛奶或BSA封閉，降低非特異性結(jié)合。
抗體配對(duì)：選擇針對(duì)不同表位的捕獲抗體和檢測(cè)抗體，避免與重組蛋白的標(biāo)簽產(chǎn)生交叉反應(yīng)。
蛋白相互作用實(shí)驗(yàn)
標(biāo)簽選擇：若使用Pull-down實(shí)驗(yàn)，優(yōu)先選擇GST或His標(biāo)簽的重組蛋白，便于親和層析分離。
反應(yīng)條件：在生理緩沖液（如PBS）中進(jìn)行，溫度控制在4℃，避免蛋白變性。
陰性對(duì)照：設(shè)置不含目標(biāo)蛋白的對(duì)照組，排除標(biāo)簽非特異性結(jié)合的干擾。
關(guān)鍵字： 大鼠甲基丙二酰輔酶A異構(gòu)酶;MCEE;重組蛋白;
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