大鼠類胰蛋白酶(TPS)重組蛋白適用于肥大細(xì)胞功能探究、炎癥通路分析、底物酶切活性測定與中和抗體篩選實(shí)驗(yàn)。
型號(hào)：YS-DB400
產(chǎn)品名稱：大鼠類胰蛋白酶(TPS)重組蛋白
物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
英文名稱：Recombinant Tryptase (TPS)
TPSAB1; Tryptase Alpha/Beta 1; Tryptase Alpha II; Tryptase Beta I; Tryptase-I; Tryptase-II; Tryptase-III
酶與激酶
感染免疫
風(fēng)濕病學(xué)
物種：Rattus norvegicus (Rat，大鼠)
來源：原核表達(dá)
宿主E.coli
內(nèi)毒素水平：<1.0EU/μg(LAL法測定)
亞細(xì)胞定位：：分泌
預(yù)測分子量：14.7kDa
實(shí)際分子量：16kDa(差異分析請(qǐng)參閱說明書)
片段與標(biāo)簽：Ile29~Pro148 with N-terminal His Tag
緩沖液成份：磷酸鹽緩沖液（pH7.4，含有 0.01% SKL, 1mM DTT, 5% Trehalose和Proclin300.）
性狀：凍干粉
純度：> 95%
等電點(diǎn)：6.9
應(yīng)用：Positive Control; Immunogen; SDS-PAGE; WB.
規(guī)格：10μg、50μg、200μg、1mg、5mg
檢測原理：
抗原抗體專一配對(duì)：抗大鼠 TPS 特異性抗體定向結(jié)合重組 TPS 蛋白特有抗原位點(diǎn)，區(qū)分體系內(nèi)其他絲氨酸蛋白酶同源蛋白。
酶標(biāo)記信號(hào)轉(zhuǎn)化：二抗共價(jià)連接顯色酶，形成 “包被抗體 - TPS - 酶標(biāo)抗體” 夾心復(fù)合物，激活底物顯色生成可見光吸光值。
線性定量校準(zhǔn)：梯度稀釋 TPS 純品建立濃度 - 吸光度標(biāo)準(zhǔn)曲線，待測樣本信號(hào)代入曲線實(shí)現(xiàn)重組蛋白定量測定。
封閉去除背景干擾：封閉液封閉固相載體空余結(jié)合位點(diǎn)，避免雜蛋白、樣本基質(zhì)非特異性黏附造成假陽性偏高。
公司正在出售的產(chǎn)品：
氨基己糖苷酶Bβ(HEXb)重組蛋白 | Recombinant Human TPPP | 組蛋白H3賴氨酸9甲基化1C封閉多肽 |
果糖二磷酸醛縮酶A(ALDOA)重組蛋白 | Recombinant Human CD316 | G蛋白偶聯(lián)受體83封閉多肽 |
鈣/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶Ⅱγ(CAMK2g)重組蛋白 | Recombinant Human PURB | 二氫嘧啶酶相關(guān)蛋白2(CRMP2/DPYL2)封閉多肽 |
二胺氧化酶(ABP1)重組蛋白 | Recombinant Human FLRT1 | 溶質(zhì)載體轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族35成員B4封閉多肽 |
髓過氧化物酶(MPO)重組蛋白 | Recombinant Human PURB | 嗅覺受體5K1封閉多肽 |
微粒體谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶2(MGST2)重組蛋白 | Recombinant SARS-CoV-2 Spike Glycoprotein RBD | 谷胱甘肽過氧化物酶8封閉多肽 |
顆粒酶A(GZMA)重組蛋白 | 大鼠類胰蛋白酶(TPS)重組蛋白Recombinant Human GABARAP | 線粒體核糖體蛋白S27封閉多肽 |
髓過氧化物酶(MPO)重組蛋白 | Recombinant Human KYNU | 轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白SEC61B封閉多肽 |
二胺氧化酶(ABP1)重組蛋白 | Recombinant Mouse eIF4E | 磷酸化蛋白激酶Aβ封閉多肽 |
使用方法：
1. 蛋白復(fù)溶
解凍：從低溫冰箱取出蛋白后，立即置于冰上緩慢解凍，避免室溫放置導(dǎo)致蛋白變性。
緩沖液選擇：根據(jù)蛋白特性選擇合適的復(fù)溶緩沖液，常用基礎(chǔ)緩沖液為10-50mM Tris-HCl（pH7.0-8.0）或PBS（pH7.2-7.4）；部分蛋白需添加100-300mM NaCl維持滲透壓，或添加1-5mM DTT、β-巰基乙醇等還原劑保持蛋白穩(wěn)定性。
復(fù)溶操作：根據(jù)蛋白濃度，加入適量緩沖液使終濃度達(dá)到0.1-1.0mg/mL（部分難溶蛋白可適當(dāng)調(diào)整濃度）；輕輕顛倒離心管或用移液器緩慢吹打混勻，避免劇烈震蕩；置于冰上靜置10-30分鐘，期間可輕柔混勻2-3次，確保蛋白充分溶解。
2. 活性測定（以酶類蛋白為例）
試劑準(zhǔn)備：根據(jù)酶的催化特性，配制相應(yīng)的底物溶液、輔助因子溶液、反應(yīng)緩沖液等；確保所有試劑均為分析純以上級(jí)別，且在有效期內(nèi)。
反應(yīng)體系優(yōu)化：通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定酶的最適反應(yīng)溫度、pH值、底物濃度、酶濃度等參數(shù)；通常反應(yīng)體系體積為50-200μL，酶濃度需根據(jù)活性高低調(diào)整。
檢測操作：按照優(yōu)化后的反應(yīng)體系依次加入試劑，啟動(dòng)反應(yīng)后，通過分光光度法、熒光法、比色法等檢測方法，實(shí)時(shí)或終點(diǎn)檢測底物消耗、產(chǎn)物生成的信號(hào)變化。
活性計(jì)算：根據(jù)檢測到的信號(hào)變化值，結(jié)合摩爾消光系數(shù)、熒光量子產(chǎn)率等參數(shù)，計(jì)算酶的活性單位（U）；1U定義為在特定條件下，每分鐘催化1μmol底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物的酶量。
3. Western Blot檢測
樣品處理：取適量復(fù)溶后的蛋白溶液，加入等體積的2×SDS上樣緩沖液，沸水浴加熱5-10分鐘使蛋白變性；若蛋白含二硫鍵，可添加β-巰基乙醇或DTT輔助變性。
電泳分離：將變性后的樣品加入SDS-PAGE凝膠的上樣孔，同時(shí)加入蛋白Marker；先以80V電壓運(yùn)行濃縮膠（約30分鐘），待樣品進(jìn)入分離膠后，調(diào)整電壓至120V繼續(xù)電泳（約60-90分鐘），直至蛋白Marker分離清晰。
轉(zhuǎn)膜操作：根據(jù)蛋白分子量選擇合適孔徑的PVDF或NC膜；采用濕轉(zhuǎn)或半干轉(zhuǎn)法將凝膠中的蛋白轉(zhuǎn)移至膜上，濕轉(zhuǎn)條件通常為200-300mA電流，轉(zhuǎn)膜時(shí)間60-120分鐘；轉(zhuǎn)膜后可通過麗春紅染色確認(rèn)轉(zhuǎn)膜效果。
封閉與孵育：用5%脫脂牛奶或BSA溶液封閉膜1-2小時(shí)，封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)；加入一抗（按說明書推薦比例稀釋），4℃孵育過夜；次日用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘；加入HRP標(biāo)記的二抗（按說明書推薦比例稀釋），室溫孵育1小時(shí)；再次用TBST緩沖液洗膜3次，每次10分鐘。
顯色檢測：將膜浸入ECL化學(xué)發(fā)光試劑中，避光孵育1-5分鐘；使用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)曝光檢測蛋白條帶，根據(jù)條帶位置和灰度分析蛋白表達(dá)情況。
關(guān)鍵字： 大鼠類胰蛋白酶;TPS;重組蛋白;
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