?產(chǎn)品名稱：禽腎炎病毒通用PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Avian Nephritis Virus（ANV）RTPCR
貨號(hào)：YS-P013846
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?：50T/盒
檢測(cè)原理：
采用病毒基因組 RNA 反轉(zhuǎn)錄 + 雙重 PCR 模式，先將樣本病毒 RNA 逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA，消除 RNA 降解對(duì)檢測(cè)結(jié)果的干擾。
設(shè)計(jì)禽腎炎病毒全血清型共有保守區(qū)域上下游引物，可覆蓋不同亞型毒株，實(shí)現(xiàn)通用型篩查，避免漏檢變異毒株。
采用熒光染料嵌入擴(kuò)增產(chǎn)物，擴(kuò)增過(guò)程實(shí)時(shí)產(chǎn)生熒光信號(hào)，依據(jù)熒光閾值 Ct 值定性，無(wú)需開(kāi)蓋電泳，降低樣本交叉污染。
實(shí)驗(yàn)流程：
DNA提?。颖局苽鋮^(qū)）
使用自選方法或兼容的核酸提取試劑盒純化樣本DNA，確保無(wú)抑制劑殘留。
標(biāo)準(zhǔn)曲線制備（樣本制備區(qū)）
標(biāo)記6支離心管為7至2號(hào)，每管加入45 μL DEPC-H2O（需使用帶濾芯槍頭）。
梯度稀釋陽(yáng)性對(duì)照：
7號(hào)管：加入5 μL 1×10^8拷貝/μL陽(yáng)性對(duì)照，震蕩混勻，得1×10^7拷貝/μL標(biāo)準(zhǔn)品；
依次稀釋至2號(hào)管，最終濃度跨5個(gè)數(shù)量級(jí)（1×10^7至1×10^3拷貝/μL）。
所有標(biāo)準(zhǔn)品置于冰上備用，避免反復(fù)凍融。
試劑配制（試劑準(zhǔn)備區(qū)）
反應(yīng)液避光解凍后渦旋混勻，短暫離心分裝至PCR管。
每反應(yīng)體系20 μL，含預(yù)混引物、熒光染料及緩沖液。
加樣（樣本處理區(qū)）
分別加入5 μL待測(cè)DNA或標(biāo)準(zhǔn)品至反應(yīng)管，陰性對(duì)照以DEPC-H2O替代。
蓋緊管蓋，避免氣泡干擾。
PCR擴(kuò)增（核酸擴(kuò)增區(qū)）
按以下程序運(yùn)行定量PCR儀：
預(yù)變性：95℃ 2分鐘；
循環(huán)階段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析（可選）。
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注意事項(xiàng)：
試劑盒含生物源性質(zhì)粒模板，操作全程佩戴手套、口罩，陽(yáng)性模板僅在生物安全柜開(kāi)蓋；
所有一次性耗材、PCR 廢液、電泳凝膠實(shí)驗(yàn)后 121℃高壓滅菌再丟棄；
試劑避免反復(fù)凍融，單次融化冰上放置不超過(guò) 2 h，使用完畢立即放回 - 20℃；
移液器吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸取，防止交叉污染；
試劑盒僅用于科研檢測(cè)，嚴(yán)禁人臨床體外診斷；
擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū)產(chǎn)物不可帶回試劑、提取區(qū)，防止氣溶膠大面積污染實(shí)驗(yàn)室；
若陰性對(duì)照持續(xù)出現(xiàn)雜帶，全部更換全新試劑盒，實(shí)驗(yàn)室臺(tái)面、移液器紫外過(guò)夜消毒。
關(guān)鍵字： 禽腎炎病毒通用;PCR檢測(cè)試劑盒;
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