?產(chǎn)品名稱：禽正呼腸孤病毒PCR檢測(cè)試劑盒
英文名稱：Avian OrthoreovirusRTPCR
貨號(hào)：YS-P013847
分類：PCR檢測(cè)試劑盒
規(guī)格?：50T/盒
檢測(cè)原理：
試劑盒配套專一核酸裂解液，可快速裂解禽關(guān)節(jié)、臟器樣本細(xì)胞，特異性剝離病毒雙層衣殼釋放分段雙鏈 RNA 基因組。
針對(duì)呼腸孤病毒分段 RNA 的 S3 基因設(shè)計(jì)特異性探針，擴(kuò)增時(shí)探針與目標(biāo)序列結(jié)合釋放熒光，區(qū)分非特異性雜擴(kuò)增片段。
設(shè)置禽內(nèi)參基因同步擴(kuò)增通道，校正樣本核酸提取失敗、PCR 抑制劑干擾造成的假陰性結(jié)果，提升檢測(cè)準(zhǔn)確度。
實(shí)驗(yàn)流程：
樣本制備：
使用CTAB法或商業(yè)DNA提取試劑盒從組織中提取基因組DNA。
建議DNA濃度≥20 ng/μL，A260/A280比值1.8~2.0。
反應(yīng)體系配制（20 μL體系示例）：
預(yù)混PCR Master Mix（含染料、dNTPs、Taq酶等）
特異性引物混合液
模板DNA（2~5 μL）
補(bǔ)充無(wú)核酸酶水至終體積。
PCR擴(kuò)增程序：
預(yù)變性：95℃ 5分鐘；
循環(huán)階段（40~45 cycles）：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（采集熒光信號(hào)）；
熔解曲線分析：60~95℃（可選，用于驗(yàn)證擴(kuò)增特異性）。
結(jié)果判讀：
陽(yáng)性：Ct值≤35且熔解曲線峰單一；
陰性：Ct值≥40或無(wú)擴(kuò)增曲線；
可疑：35<Ct值<40，建議復(fù)測(cè)或結(jié)合熔解曲線分析。
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注意事項(xiàng)：
所有耗材必須無(wú)核酸酶，吸頭一次性使用，禁止重復(fù)吸?。?/span>
陽(yáng)性模板拷貝濃度高，開(kāi)蓋操作輕柔，避免氣溶膠擴(kuò)散造成全域污染；
試劑融化后冰上放置不超過(guò) 2 h，用完立即放回 - 20℃；
廢棄 PCR 管、擴(kuò)增產(chǎn)物、實(shí)驗(yàn)廢液統(tǒng)一 121℃高壓滅菌后丟棄；
試劑盒僅用于動(dòng)植物、水產(chǎn)、微生物疫病科研檢測(cè)，禁止人體臨床檢測(cè)；
移液器、操作臺(tái)定期紫外消毒，長(zhǎng)期污染需更換全新試劑盒全套試劑。
關(guān)鍵字： 禽正呼腸孤病毒;PCR檢測(cè)試劑盒;
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