D-luciferin，potassium salt熒光素產(chǎn)品說(shuō)明書

發(fā)光原理

哺乳動(dòng)物生物發(fā)光，一般是將Firefly luciferase基因（由554個(gè)氨基酸構(gòu)成，約50KD）即熒光素酶基因整合到預(yù)期觀察的細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)熒光素酶，培養(yǎng)出能穩(wěn)定表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞株，當(dāng)細(xì)胞分裂、轉(zhuǎn)移、分化時(shí), 熒光素酶也會(huì)得到持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)?；?、細(xì)胞和活體動(dòng)物都可被熒光素酶基因標(biāo)記。將標(biāo)記好的細(xì)胞接種到實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體內(nèi)后，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物熒光素(D-luciferin，potassium salt，以下均簡(jiǎn)稱熒光素)，即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。所發(fā)的光波長(zhǎng)在540-600nm。這種酶在ATP，氧存在的條件下，催化熒光素的氧化反應(yīng)才可以發(fā)光，因此只有在活細(xì)胞內(nèi)才會(huì)產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象，并且發(fā)光光強(qiáng)度與標(biāo)記細(xì)胞的數(shù)目線性相關(guān)。

結(jié)構(gòu)與性能

熒光素在氧氣、ATP存在的條件下和熒光素酶發(fā)生反應(yīng)，生成氧化熒光素(oxyluciferin)，并產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。熒光素是腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)的，約一分鐘就可以擴(kuò)散到小鼠全身。熒光素的半衰期約三個(gè)小時(shí)，只有活細(xì)胞才能夠持續(xù)表達(dá)熒光素酶。

(1) 熒光素不會(huì)影響動(dòng)物的正常生理功能。

(2) 熒光素是280道爾頓的小分子，水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。

(3) 熒光素在體內(nèi)擴(kuò)散速度快，可通過(guò)腹腔注射或尾部靜脈注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。腹腔注射擴(kuò)散較慢，持續(xù)發(fā)光長(zhǎng)。熒光素腹腔注射老鼠后約1min后表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的最高點(diǎn)，在最高點(diǎn)持續(xù)約20~30 min后開始衰減，約3h后熒光素排除，發(fā)光全部消失，檢測(cè)時(shí)間是在注射后15~35min之間；若進(jìn)行熒光素靜脈注射，擴(kuò)散快，但發(fā)光持續(xù)時(shí)間很短?？蒲腥藛T根據(jù)大量的實(shí)驗(yàn)總結(jié)出熒光素的合適的用量是150mg/kg，即體重20克的小鼠需要3毫克的熒光素。

(4) 觀察時(shí)間的間隔沒(méi)有最短限制，只要觀察的條件控制一致就可以。雖然底物在動(dòng)物體內(nèi)有一定的代謝過(guò)程，但是上一次底物的殘留曲線可以知道，可以控制對(duì)下一次觀察結(jié)果的影響。

儲(chǔ)存與運(yùn)輸

一般放在-20℃的冰箱即可，半年以上不使用放在-80℃的冰箱，溶解配制后放在4℃冰箱，短期運(yùn)輸放在4℃環(huán)境。

應(yīng)用領(lǐng)域

腫瘤，干細(xì)胞，藥物開發(fā)，基因治療，轉(zhuǎn)基因小鼠，免疫學(xué)等等。

成像效果

1. 檢測(cè)靈敏度（所用細(xì)胞為本公司生物發(fā)光的肝癌細(xì)胞）

從左到右依次注射的細(xì)胞為100個(gè)，1000個(gè)，10000個(gè)；曝光時(shí)間依次為20秒，5秒，5秒。所用儀器為本公司的NightOWL Ⅱ LB983 NC100活體成像系統(tǒng)。檢測(cè)地點(diǎn)為中國(guó)軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院。  

1. 成像效果展示（所用細(xì)胞為本公司生物發(fā)光的胰腺癌細(xì)胞）

胰腺癌原位接種，檢測(cè)地點(diǎn)為中國(guó)科學(xué)院，所用儀器為L(zhǎng)umina Ⅱ。