活腫瘤組織凍存試劑盒（LT2601）

組織凍存管 X3  

組織支架 X3

組織凍存液：

     No.1 玻璃化液 1(V1) …………. 1X10ml 管

     No.2 玻璃化液 2(V2) …………. 1X10ml 管

組織凍存流程： 清洗、處理組織→玻璃化液 1、2→液氮玻璃化→儲存

自備材料：

1. 生理鹽水/1XPBS 2. 眼科剪 3. 眼科鑷 4. 有齒鑷 5. 平口鑷 6. 組織處理模具及配套刀片（LT2603） 7. 無菌液氮 8. 無菌液氮盒 9. 秒表或計時器 10. 100mm 培養(yǎng)皿 X4 11. 無菌紗布 12. 水浴鍋

操作步驟：

a. 在組織凍存管上記錄清楚腫瘤組織的相關信息；

b. 水浴加熱并維持玻璃化液 1、玻璃化液 2 為 26℃； 注意：在后續(xù)使用玻璃化液 1、玻璃化液 2 時，維持液溫為 26℃，有利于提高組織復蘇后 的存活率。

c. 在 100mm 培養(yǎng)皿中，用生理鹽水清洗腫瘤組織，使用眼科剪、眼科鑷修剪 去除血管、包膜以及壞死組織；

d. 使用組織處理模具將腫瘤組織切成 1mm 厚的薄片； 注意：經(jīng)驗證，組織切片的厚度為 1mm。

e. 在 100mm 培養(yǎng)皿中，用生理鹽水再次清洗切好的組織，并用無菌紗布吸除 組織表面的液體；

f. 使用平口鑷將腫瘤組織切片浸入 V1 管中的 10ml 玻璃化液 1 中，26℃， 25min ；

g. 將 V1 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，在移入 V2 管前使 用無菌紗布盡量將組織表面的玻璃化液 1 吸除； 注意：盡量減少組織切片從玻璃化液 1 移入玻璃化液 2 之間的操作時間。

h. 使用平口鑷將組織切片移入 V2 管中的 10ml 玻璃化液 2 中，26℃， 15min 或 者待組織切片自然沉降至管底；

注意：如果組織切片在 15min 內(nèi)沒有自然沉降至 V2 管的管底，等待至其沉至管底；如果組織切片早于 15min 沉至管底，讓組織切片在 V2 管內(nèi)浸泡至少 15min。

i. 將組織切片平鋪擺放于組織支架上；

j. 將組織支架平放于無菌紗布上，盡量吸除組織切片表面的液體；

k. 使用有齒鑷將組織支架快速浸入無菌液氮，時間不少于 5min； l. 快速將組織支架移入組織凍存管內(nèi)，旋緊凍存管，將凍存管移入液氮罐中保 存。

注意：在組織支架移入組織凍存管前，檢查組織切片是否透明，透明的組織切片意味著組 織切片成功被玻璃化。  

活腫瘤組織復蘇試劑盒（LT2602）

組織復蘇液：

 No.1 復蘇液 1 (T1) ………………… 1X30ml 管

 No.2 復蘇液 2 (T2) ………………… 1X10ml 管

 No.3 復蘇液 3 (T3) ……………… 1X10ml 管    

 No.4 復蘇液 4 (T4) ……………… 1X10ml 管

自備材料：

1. 有齒鑷 2. 平口鑷 3. 無菌液氮 4. 無菌液氮盒 5. 秒表或計時器 6. 100mm 培養(yǎng)皿 X3 7. 水浴鍋

操作步驟：

a. 水浴加熱并維持復蘇液 1 為 37℃，復蘇液 2、3、4 為 26℃； 注意：在后續(xù)使用復蘇液 1 時維持液溫為 37℃，復蘇液 2、3、4 時維持液溫為 26℃， 有利于提高組織復蘇后的存活率。  

b. 使用有齒鑷在液氮中旋開組織凍存管并取出組織支架；

c. 迅速將組織支架沉浸入 37℃的復蘇液 1 ，并不斷輕搖 T1 管，待組織切 片從組織支架上脫落后，取出支架，讓組織切片浸泡 3min； d. 將 T1 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，使用平口鑷將組 織切片移入 T2 管中的 10ml 復蘇液 2 中，26℃，5min； e. 將 T2 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，使用平口鑷將組 織切片移入 T3 管中的 10ml 復蘇液 3 中，26℃，10min； f. 將 T3 管中的液體及組織切片全部倒入 100mm 培養(yǎng)皿中，使用平口鑷將組 織切片移入 T4 管中的 10ml 復蘇液 4 中，26℃，10min，即獲得復蘇后 的腫瘤組織； g. 用生理鹽水沖洗后即可移植于免疫缺陷小鼠體內(nèi)建立 PDX 模型，或用于 其他研究。

注意：盡量減少組織切片從一種復蘇液移入另一種復蘇液之間的操作時間。