小鼠羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞
產(chǎn)品信息：
英文名稱(chēng) | Mouse Amniotic Mesenchymal Stem Cells | 種屬 | 小鼠 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10^5Cells/T25 | 貨號(hào) | A01X2004 |
組織來(lái)源 | 羊膜 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
小鼠羊膜間充質(zhì)干分離自胎盤(pán)羊膜組織；胎盤(pán)（placenta）是哺乳動(dòng)物妊娠期間由胚胎的胚膜和母體子宮內(nèi)膜聯(lián)合長(zhǎng)成的母子間交換物質(zhì)的過(guò)渡性器官，由羊膜、葉狀絨毛膜和底蛻膜構(gòu)成。胎兒在子宮中發(fā)育，依靠胎盤(pán)從母體取得營(yíng)養(yǎng)，而雙方保持相當(dāng)?shù)莫?dú)立性。胎盤(pán)還產(chǎn)生多種維持妊娠的激素，是一個(gè)重要的內(nèi)分泌器官。有些爬行類(lèi)和魚(yú)類(lèi)也以胎生方式繁殖后代，胚胎生長(zhǎng)出一些輔助結(jié)構(gòu)如卵黃囊、鰓絲等與母體組織緊密結(jié)合，以達(dá)到母子間物質(zhì)的交換，這樣的結(jié)構(gòu)稱(chēng)假胎盤(pán)。羊膜是胎盤(pán)的內(nèi)層，與眼結(jié)膜組織結(jié)構(gòu)相似，含有眼表上皮細(xì)胞，包括結(jié)膜細(xì)胞和角膜上皮細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的物質(zhì)，其光滑，無(wú)血管、神經(jīng)及淋巴，具有一定的彈性；在電鏡下，其分為五層：上皮層、基底膜、致密層、纖維母細(xì)胞層和海綿層，羊膜基底膜和羊膜羊膜基質(zhì)層含有大量不同的膠元，主要為Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ型膠原和纖維粘連蛋白、層粘連蛋白等成份。羊膜細(xì)胞主要由羊膜上皮細(xì)胞和羊膜間充質(zhì)細(xì)胞組成，均具有多分化潛能，可轉(zhuǎn)化為神經(jīng)元，且還有合成、釋放生物活性物質(zhì)和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的功能。
方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜間充質(zhì)干采用-膠原酶混合酶消化后差速貼壁制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的小鼠羊膜間充質(zhì)經(jīng)CD44免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代左右
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
小鼠羊膜間充質(zhì)干體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專(zhuān)用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
與細(xì)胞系的主要區(qū)別：
特征 原代細(xì)胞 永生化細(xì)胞系 (如HeLa細(xì)胞)
來(lái)源 直接從生物體組織分離 通常經(jīng)過(guò)基因改造或來(lái)源于癌組織
壽命 有限，受海弗利克極限限制 無(wú)限，可無(wú)限增殖（永生化）
遺傳背景 穩(wěn)定，保留供體特征 不穩(wěn)定，易發(fā)生遺傳漂變
生理相關(guān)性 高，更接近體內(nèi)真實(shí)情況 較低，可能丟失組織特異性特征
培養(yǎng)難度 高，對(duì)培養(yǎng)條件要求苛刻 低，易于培養(yǎng)和維持
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細(xì)胞培養(yǎng)操作
消化培養(yǎng)法
此方法利用酶（如胰蛋白酶、膠原酶）將組織分散成單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)，形成細(xì)胞懸液進(jìn)行培養(yǎng)，細(xì)胞生長(zhǎng)較快。
取材與剪切
同樣在無(wú)菌條件下獲取組織，并用Hanks液清洗干凈。
將組織剪切成更小的碎塊（約 1 mm3），以便酶更好地發(fā)揮作用。
酶消化
將組織塊轉(zhuǎn)移至容器中，加入適量的酶消化液（如0.25%胰蛋白酶）。
在 37℃ 條件下消化 20-40分鐘，期間可適當(dāng)搖動(dòng)或吹打。消化程度需在顯微鏡下觀察，當(dāng)組織分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞時(shí)，立即終止消化。
終止與洗滌
加入含血清的培養(yǎng)液以終止酶的消化作用（血清可抑制胰蛋白酶活性）。
將細(xì)胞懸液通過(guò)篩網(wǎng)過(guò)濾，除去未消化的組織塊。然后以 1000 rpm 離心 5-10分鐘，棄去上清液。
接種與培養(yǎng)
用適量新鮮培養(yǎng)液重懸細(xì)胞沉淀，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并調(diào)整細(xì)胞密度至實(shí)驗(yàn)所需濃度（例如 5×10 cells/mL）。
將細(xì)胞懸液分裝至培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5% CO培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
關(guān)鍵字： 小鼠羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞;羊膜;貼壁;
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