兔食管上皮細胞
產(chǎn)品信息：
英文名稱 | Rabbit Esophageal Epithelial Cells | 種屬 | 兔 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10^5Cells/T25 | 貨號 | A01X2045 |
組織來源 | 食管 | 生長特性 | 貼壁 |
細胞簡介：
兔食管上皮分離自食管組織；食管是咽和胃之間的消化管，食管在系統(tǒng)發(fā)生上起初很短，隨著頸部的伸長和心肺的下降，而逐漸增長。食管可分為頸段、胸段和腹段。脊椎動物食管的頸段位于氣管背后和脊柱前端，胸段位于左、右肺之間的縱膈內(nèi)，胸段通過膈孔與腹腔內(nèi)腹相連，腹段很短與胃相連。在發(fā)育過程中，食管的上皮細胞增殖，由單層變?yōu)閺蛯?，食管使管腔變狹窄，甚至一度閉鎖，以后管腔又重新出現(xiàn)。哺乳動物的食管結(jié)構(gòu)上由內(nèi)向外分四層：黏膜層、黏膜下層、肌層和外膜。其中，黏膜層，包括上皮、固有層和黏膜肌層。上皮為較厚的未角化的復層扁平上皮，耐摩擦，有保護作用。在食管與胃賁門交界處，復層扁平上皮突然變成單層柱狀上皮。食管被一層線性排列的、無角化、潮濕的復層扁平上皮細胞覆蓋，其頂端細胞膜和細胞間連接復合體聯(lián)合在一起產(chǎn)生有效滲透屏障，防止食管內(nèi)容物的滲入。特別的是，層屏障使表層細胞的基質(zhì)外側(cè)細胞膜和深層細胞的全部細胞膜不暴露于食管腔內(nèi)規(guī)律的大幅波動的滲透壓之下。從組織學上講，食管上皮由兩層組成，基底層和分化層；其中，僅基底層的細胞可以增殖，然后向食管腔移行。移行過程伴隨有分化的發(fā)生和分化標記的依序表達。食管上皮細胞的培養(yǎng)是研究食管正常生理機制和食管癌變機制的非常好的體外模型。
方法簡介 實驗室分離的兔食管上皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法，并通過上皮細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測 實驗室分離的兔食管上皮經(jīng)PCK免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件：鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2）
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長特性：貼壁
細胞形態(tài)：上皮細胞樣
傳代特性：可傳1-2代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔食管上皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
與細胞系的主要區(qū)別：
特征 原代細胞 永生化細胞系 (如HeLa細胞)
來源 直接從生物體組織分離 通常經(jīng)過基因改造或來源于癌組織
壽命 有限，受海弗利克極限限制 無限，可無限增殖（永生化）
遺傳背景 穩(wěn)定，保留供體特征 不穩(wěn)定，易發(fā)生遺傳漂變
生理相關(guān)性 高，更接近體內(nèi)真實情況 較低，可能丟失組織特異性特征
培養(yǎng)難度 高，對培養(yǎng)條件要求苛刻 低，易于培養(yǎng)和維持
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細胞培養(yǎng)操作
消化培養(yǎng)法
此方法利用酶（如胰蛋白酶、膠原酶）將組織分散成單個細胞或細胞團，形成細胞懸液進行培養(yǎng)，細胞生長較快。
取材與剪切
同樣在無菌條件下獲取組織，并用Hanks液清洗干凈。
將組織剪切成更小的碎塊（約 1 mm3），以便酶更好地發(fā)揮作用。
酶消化
將組織塊轉(zhuǎn)移至容器中，加入適量的酶消化液（如0.25%胰蛋白酶）。
在 37℃ 條件下消化 20-40分鐘，期間可適當搖動或吹打。消化程度需在顯微鏡下觀察，當組織分散成細胞團或單個細胞時，立即終止消化。
終止與洗滌
加入含血清的培養(yǎng)液以終止酶的消化作用（血清可抑制胰蛋白酶活性）。
將細胞懸液通過篩網(wǎng)過濾，除去未消化的組織塊。然后以 1000 rpm 離心 5-10分鐘，棄去上清液。
接種與培養(yǎng)
用適量新鮮培養(yǎng)液重懸細胞沉淀，進行細胞計數(shù)，并調(diào)整細胞密度至實驗所需濃度（例如 5×10 cells/mL）。
將細胞懸液分裝至培養(yǎng)瓶中，放入 37℃、5% CO培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。
關(guān)鍵字： 兔食管上皮細胞;食管;貼壁;
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