IEC-6大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基

商品屬性：

產(chǎn)品介紹：

IEC-6細(xì)胞專用培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持IEC-6細(xì)胞最佳的生長(zhǎng)狀態(tài)。

本產(chǎn)品中已包含 IEC-6 細(xì)胞生長(zhǎng)所需的各種成分，無(wú)需添加任何成分，可直接用于IEC-6細(xì)胞的培養(yǎng)。

產(chǎn)品主要成分

DMEM（含NaHCO3 1.5g/L）培養(yǎng)基               445 ml

特級(jí)胎牛血清     50 ml

P/S青霉素-鏈霉素    5 ml

牛胰島素         0.01mg/ml

運(yùn)輸和保存

運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸

保存方法：2℃～8℃，避光，保存1個(gè)月；-20℃，避光，保存3個(gè)月。
質(zhì)量控制

實(shí)驗(yàn)原理：

以DMEM高糖培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清和1%抗生素，模擬大鼠小腸隱窩上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)環(huán)境，為IEC-6細(xì)胞提供充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和能量，支持細(xì)胞的貼壁生長(zhǎng)和增殖，維持細(xì)胞的小腸上皮細(xì)胞特性，用于腸道疾病的研究和藥物篩選。
操作要點(diǎn)：

1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。

2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)完全解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。

4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。

5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。

6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
使用方法：

（一）常規(guī)使用步驟

培養(yǎng)基從 2~8℃取出，37℃水浴預(yù)熱 15~20min，避免冷刺激細(xì)胞。

超凈臺(tái)內(nèi)用 75% 酒精擦拭培養(yǎng)基瓶身，無(wú)菌操作開(kāi)封。

吸棄培養(yǎng)瓶中舊培養(yǎng)基，加入預(yù)熱的專用培養(yǎng)基（T25 瓶加 5~6mL，T75 瓶加 12~15mL）。

置于37℃、5% CO?、飽和濕度培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

（二）細(xì)胞復(fù)蘇

液氮取出凍存管，37℃快速融化（1~2min），75% 酒精消毒后轉(zhuǎn)入超凈臺(tái)。

細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含 5mL 預(yù)熱專用培養(yǎng)基的 15mL 離心管，1000rpm（200g）離心 3min，棄上清。

加 5mL 專用培養(yǎng)基重懸，轉(zhuǎn)入 T25 培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)，次日換液去除死細(xì)胞。

（三）細(xì)胞傳代（80~90% 匯合度）

吸棄舊培養(yǎng)基，無(wú)菌 PBS（無(wú) Ca2?/Mg2?）洗細(xì)胞 1~2 次，吸棄 PBS。

T25 瓶加 1mL 0.25% 胰酶 - EDTA，37℃消化1~3min，顯微鏡下見(jiàn)細(xì)胞變圓、間隙增大即終止。

加 3~4mL 專用培養(yǎng)基終止消化，輕柔吹打至單細(xì)胞懸液，1000rpm 離心 3min，棄上清。

專用培養(yǎng)基重懸，按1:3~1:4分瓶，補(bǔ)足培養(yǎng)基后 37℃培養(yǎng)。

（四）細(xì)胞凍存

傳代步驟收集細(xì)胞，離心棄上清。

凍存液（90%FBS+10%DMSO）重懸，密度1~3×10?細(xì)胞 / 管。

分裝入凍存管，程序降溫盒 - 80℃過(guò)夜，次日轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
公司正在出售的產(chǎn)品：