兔腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞
細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔腸微血管內(nèi)皮分離自腸道組織；腸道指的是從胃幽門至門的消化管。腸是消化管中長(zhǎng)的一段，也是功能重要的一段。哺乳動(dòng)物的腸包括小腸、大腸和直腸3大段。大量的消化作用和幾乎全部消化產(chǎn)物的吸收都是在小腸內(nèi)進(jìn)行的，大腸主要濃縮食物殘?jiān)?，形成糞便，再通過直腸經(jīng)門排出體外。腸道堪稱身體勞累的器官——每天不停地消化、吸收食物，以提供足夠的養(yǎng)分，其實(shí)它的功能還遠(yuǎn)不止此——它還是機(jī)體內(nèi)大的微生態(tài)系統(tǒng)。微血管是極細(xì)微的血管，管徑平均為6-9μm，連于動(dòng)、靜脈之間，互相連接成網(wǎng)狀。微血管壁薄，管徑較小，血流很慢，通透性大。其功能是利于血液與組織之間進(jìn)行物質(zhì)交換。其管壁主要由一層內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成，在內(nèi)皮外面有一薄層結(jié)締組織。另外還?？梢姷揭环N扁而有突起的細(xì)胞貼在微血管的管壁外面，稱為周細(xì)胞。
方法簡(jiǎn)介 實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸微血管內(nèi)皮采用-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法、并通過內(nèi)皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)室分離的兔腸微血管內(nèi)皮經(jīng)CD31免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
培養(yǎng)信息：
包被條件：PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%）
培養(yǎng)基：含F(xiàn)BS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁
細(xì)胞形態(tài)：內(nèi)皮細(xì)胞樣
傳代特性：可傳2-3代
消化液：0.25%
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
兔腸微血管內(nèi)皮體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。
產(chǎn)品信息：
英文名稱 | Rabbit Intestinal Microvascular Endothelial Cells | 種屬 | 兔 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 5×10^5Cells/T25 | 貨號(hào) | A01X2071 |
組織來源 | 腸 | 生長(zhǎng)特性 | 貼壁 |
細(xì)胞培養(yǎng)操作：
1. 細(xì)胞復(fù)蘇
運(yùn)輸與接收：細(xì)胞以液氮凍存形式運(yùn)輸，收到后立即用75%酒精噴灑消毒細(xì)胞瓶，置于超凈臺(tái)內(nèi)無菌操作。
復(fù)蘇操作：將細(xì)胞瓶放入37℃、5% CO培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)穩(wěn)定狀態(tài)，顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和密度，記錄初始狀態(tài)（建議40x、100x、200x各拍一張照片）。
2. 細(xì)胞傳代
傳代時(shí)機(jī)：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)80%匯合度時(shí)進(jìn)行傳代。
操作步驟：
棄去舊培養(yǎng)基，用無鈣鎂PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液（1-2 mL），37℃孵育1-2分鐘，顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓脫落。
加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細(xì)胞完全脫落。
離心（1000 RPM，5分鐘），棄上清，用1-2 mL培養(yǎng)基重懸。
按1:2比例分瓶傳代（如T25瓶分至兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充新鮮培養(yǎng)基至5 mL。
換液頻率：每2-3天換液一次。
3. 細(xì)胞凍存
凍存液：使用無血清凍存液。
凍存步驟：細(xì)胞傳代后，用胰蛋白酶消化并離心，重懸于凍存液，緩慢降溫至-80℃，最終轉(zhuǎn)入液氮長(zhǎng)期保存。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人白介素10(IL-10)核酸檢測(cè)試劑盒 | MMP13, Alexa Fluor 750 conjugated AF750標(biāo)記的基質(zhì)金屬蛋白酶13抗體 |
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核心特點(diǎn)：
高度生理相關(guān)性：保留了體內(nèi)來源組織的結(jié)構(gòu)、功能和基因表達(dá)特征。
有限壽命：與無限增殖的腫瘤細(xì)胞系不同，原代細(xì)胞增殖能力有限，經(jīng)過一定次數(shù)的分裂后會(huì)進(jìn)入衰老期，這更符合正常細(xì)胞的生理狀態(tài)。
異質(zhì)性：初始培養(yǎng)物通常是多種細(xì)胞類型的混合物，有時(shí)需要通過差速貼壁等方法進(jìn)行純化。
操作要求高：對(duì)培養(yǎng)環(huán)境、試劑質(zhì)量和無菌操作的要求極為嚴(yán)格，培養(yǎng)難度大于永生化細(xì)胞系。
關(guān)鍵字： 兔腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞;腸;貼壁;
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