人類風濕關節(jié)炎滑膜成纖維細胞

細胞簡介：

滑膜是關節(jié)囊的內層，淡紅色，平滑閃光，薄而柔潤，由疏松結締組織組成。關節(jié)腔內的所有結構，除關節(jié)軟骨、半月軟骨板以外 ,即便是通過關節(jié)腔的肌腱、韌帶等均全部為滑膜所包裹。

滑膜分泌滑液，在關節(jié)活動中起重要作用。正?；し譃閮蓪樱幢〉募毎麑?/span> (內腔層)和血管層(內膜下層)，是血管豐富的關節(jié)囊內膜，貼附于非關節(jié)面部分，覆蓋于關節(jié)囊內的骨面上，不在軟骨面上，此部分稱為邊緣區(qū)或裸區(qū)?；こ史奂t色，光滑發(fā)亮、濕而潤滑，有時可見絨毛，內含膠原性纖維。

滑膜細胞有 A、B兩型。巨噬細胞樣A型細胞，表面有絲狀偽足、漿膜內陷、囊泡、線粒體、溶酶體、胞漿纖維和高爾基體，具有吞噬功能；B型成纖維樣滑膜細胞(FLS) ，有高濃度的內質網結構，是介導 RA 關節(jié)破壞的主要細胞。

人類風濕關節(jié)炎滑膜成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng)，以此保證該細胞的最佳培養(yǎng)狀態(tài)

細胞特性：

1）細胞來源于手術取得的患類風濕性關節(jié)炎病人的關節(jié)滑膜組織。

2)細胞鑒定：纖維連接蛋白（Fibronectin）或波形蛋白（Vimentin）熒光染色為陽性。

3)經鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。

5)細胞生長方式：成纖維樣細胞，貼壁培養(yǎng)。

產品信息：

細胞培養(yǎng)操作：

1. 細胞復蘇

運輸與接收：細胞以液氮凍存形式運輸，收到后立即用75%酒精噴灑消毒細胞瓶，置于超凈臺內無菌操作。

復蘇操作：將細胞瓶放入37℃、5% CO培養(yǎng)箱中靜置3-4小時穩(wěn)定狀態(tài)，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)和密度，記錄初始狀態(tài)（建議40x、100x、200x各拍一張照片）。

2. 細胞傳代

傳代時機：當細胞密度達80%匯合度時進行傳代。

操作步驟：

棄去舊培養(yǎng)基，用無鈣鎂PBS潤洗細胞1-2次。

加入0.25%胰蛋白酶消化液（1-2 mL），37℃孵育1-2分鐘，顯微鏡下觀察細胞變圓脫落。

加入5 mL完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打使細胞完全脫落。

離心（1000 RPM，5分鐘），棄上清，用1-2 mL培養(yǎng)基重懸。

按1:2比例分瓶傳代（如T25瓶分至兩個T25瓶），補充新鮮培養(yǎng)基至5 mL。

換液頻率：每2-3天換液一次。

3. 細胞凍存

凍存液：使用無血清凍存液。

凍存步驟：細胞傳代后，用胰蛋白酶消化并離心，重懸于凍存液，緩慢降溫至-80℃，最終轉入液氮長期保存。

公司正在出售的產品：

高度生理相關性：保留了體內來源組織的結構、功能和基因表達特征。

有限壽命：與無限增殖的腫瘤細胞系不同，原代細胞增殖能力有限，經過一定次數(shù)的分裂后會進入衰老期，這更符合正常細胞的生理狀態(tài)。

異質性：初始培養(yǎng)物通常是多種細胞類型的混合物，有時需要通過差速貼壁等方法進行純化。

操作要求高：對培養(yǎng)環(huán)境、試劑質量和無菌操作的要求極為嚴格，培養(yǎng)難度大于永生化細胞系。