人肝竇內皮細胞永生化細胞專用培養(yǎng)基

商品屬性：

產品介紹：

人肝竇內皮細胞永生化細胞專用培養(yǎng)基由團隊精心優(yōu)化，經過長期測試，本產品可保持人肝竇內皮細胞永生化細胞最佳的生長狀態(tài)。

本產品中已包含人肝竇內皮細胞永生化細胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于人肝竇內皮細胞永生化細胞的培養(yǎng)。

內皮細胞培養(yǎng)體系     500 ml

產品主要成分

內皮細胞基礎培養(yǎng)基     465 ml

內皮細胞培養(yǎng)添加劑      5 ml

特級胎牛血清    25 ml

P/S青霉素-鏈霉素        5 ml

運輸和保存

運輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運輸

保存方法：    2℃～8℃，避光，保存2個月；-20℃，避光，保存6個月。
質量控制

實驗原理：

以EGM-2內皮細胞專用培養(yǎng)基為基礎，添加5%優(yōu)質胎牛血清、1%雙抗及肝竇內皮細胞特異性生長因子，模擬人肝竇內皮永生化細胞的肝組織微環(huán)境。培養(yǎng)基通過提供特異性生長信號，支持細胞貼壁生長并維持其肝竇內皮細胞功能（如白蛋白轉運、免疫調節(jié)），用于肝臟疾?。ㄈ绺斡不?、肝癌）的機制研究及藥物篩選。
培養(yǎng)基配置步驟：

1. 配置前準備

試劑與耗材：MEM培養(yǎng)基粉末（或液體）、優(yōu)質胎牛血清、青霉素-鏈霉素混合液、5-溴-2'-脫氧尿苷（可選）、無菌超純水、0.22μm無菌濾膜、無菌血清瓶、移液槍、無菌移液管等

無菌環(huán)境：超凈工作臺提前開啟紫外燈照射30分鐘消毒，實驗人員佩戴無菌手套、口罩，操作前用75%酒精擦拭雙手和工作臺

2. 基礎培養(yǎng)基配置（以粉末MEM為例）

按照MEM培養(yǎng)基說明書的比例，將適量培養(yǎng)基粉末加入到裝有900ml無菌超純水的無菌燒杯中

用磁力攪拌器充分攪拌，直至培養(yǎng)基粉末完全溶解

加入適量碳酸氫鈉粉末（根據(jù)說明書調整），調節(jié)培養(yǎng)基pH值至7.2-7.4

將溶液通過0.22μm無菌濾膜過濾除菌，轉移至無菌血清瓶中，標注“MEM基礎培養(yǎng)基”及配置日期

3. 完全培養(yǎng)基配置

在無菌條件下，向MEM基礎培養(yǎng)基中加入100ml優(yōu)質胎牛血清（使血清終濃度為10%）

加入10ml青霉素-鏈霉素混合液（使雙抗終濃度為1%）

若需要篩選TK-細胞，加入5-溴-2'-脫氧尿苷，使其終濃度為0.015mg/ml

輕輕搖晃血清瓶，使各成分充分混合，標注培養(yǎng)基名稱及配置日期

4℃避光保存，使用前提前放置至室溫

4. 培養(yǎng)基質量檢測

配置完成后，取少量培養(yǎng)基接種于無菌培養(yǎng)瓶中，37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48小時

觀察培養(yǎng)基是否渾濁、有無菌落生長，確認無菌后方可用于細胞培養(yǎng)
性能檢測與驗證方法：

1. 無菌與內毒素檢測

無菌檢測：將培養(yǎng)基接種于細菌/真菌培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)14天，觀察是否有菌落生長

內毒素檢測：采用鱟試劑法或動態(tài)濁度法，定量檢測培養(yǎng)基中內毒素含量

2. 細胞培養(yǎng)驗證

細胞生長曲線：接種相同數(shù)量細胞，每天計數(shù)細胞數(shù)量，繪制生長曲線，評估培養(yǎng)基對細胞增殖的促進作用

形態(tài)學觀察：定期用顯微鏡觀察細胞形態(tài)，判斷是否保持正常生長狀態(tài)

標志物檢測：通過免疫熒光、流式細胞術等方法檢測細胞特異性標志物表達情況

功能實驗：針對不同細胞類型設計特定功能實驗，如內皮細胞血管形成實驗、T細胞殺傷實驗等
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