小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基
商品屬性：
產(chǎn)品名稱 | 小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
英文名稱 | 小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞專用培養(yǎng)基 |
規(guī)格 | 100ML、500ML |
貨號(hào) | P-X621 |
產(chǎn)品介紹：
小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化胞細(xì)專用培養(yǎng)基由團(tuán)隊(duì)精心優(yōu)化，經(jīng)過長期測(cè)試，本產(chǎn)品可保持小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞最佳的生長狀態(tài)。
本產(chǎn)品中已包含小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞生長所需的各種成分，無需添加任何成分，可直接用于小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞永生化細(xì)胞的培養(yǎng)。
基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)體系 500 mL
產(chǎn)品主要成分
基質(zhì)細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)基 440 ml
基質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)添加劑 5 ml
特級(jí)胎牛血清 50 ml
P/S青霉素-鏈霉素 5 ml
運(yùn)輸和保存
運(yùn)輸：放置于含有生物冰袋的保溫箱中低溫運(yùn)輸
保存方法： 2℃～8℃，避光，保存2個(gè)月；-20℃，避光，保存6個(gè)月。
質(zhì)量控制
檢測(cè)項(xiàng)目 | 質(zhì)量控制 |
澄清度 | 澄清 |
PH | 7.3±0.2 |
內(nèi)毒素含量 (EU/mL) | ≤10 |
無菌檢測(cè) | 細(xì)菌 | 陰性 |
真菌 | 陰性 |
支原體 | 陰性 |
細(xì)胞生長試驗(yàn) | 細(xì)胞形態(tài) | 正常 |
細(xì)胞生長實(shí)驗(yàn) | 合格 |
實(shí)驗(yàn)原理：
以DMEM高糖培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加10%優(yōu)質(zhì)胎牛血清、1%雙抗及角膜基質(zhì)細(xì)胞生長因子（如EGF、TGF-β），模擬小鼠角膜基質(zhì)永生化細(xì)胞的眼部微環(huán)境。培養(yǎng)基中的成分可支持細(xì)胞增殖并維持其角膜基質(zhì)細(xì)胞功能（如角膜透明性維持、傷口愈合），用于小鼠角膜疾?。ㄈ缃悄?、角膜瘢痕）的研究及藥物篩選。
使用方法：
1. 培養(yǎng)基配制（若為干粉或基礎(chǔ)培養(yǎng)基）
將500ml基礎(chǔ)培養(yǎng)基溶解于適量超純水中，攪拌均勻。
依次加入5ml生長添加劑、10ml特級(jí)胎牛血清和5ml雙抗，輕輕搖勻。
用無菌濾膜（0.22μm孔徑）對(duì)混合后的培養(yǎng)基進(jìn)行過濾除菌，轉(zhuǎn)移至無菌容器中備用。
2. 細(xì)胞培養(yǎng)操作
（1）復(fù)蘇細(xì)胞
將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中，輕輕搖晃加速解凍。
解凍后，將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌離心管中，加入4ml完全培養(yǎng)基混合均勻。
1000rpm離心3min，棄去上清液，加入1-2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
將細(xì)胞懸液接種至T25培養(yǎng)瓶或6cm培養(yǎng)皿中，補(bǔ)充適量完全培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO?培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜，第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
（2）傳代培養(yǎng)
當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%-90%時(shí)，進(jìn)行傳代操作。首先棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
加入1ml消化液（0.25%Trypsin-0.02%EDTA）浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-3min，顯微鏡下觀察細(xì)胞大部分變圓并脫落時(shí)，迅速拿回操作臺(tái)。
輕敲培養(yǎng)瓶，加入2-3ml完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹打制成單細(xì)胞懸液。
將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至無菌離心管，1000rpm離心5min，棄去上清液，加入1-2ml完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。
按1:2的比例將細(xì)胞懸液接種至新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，補(bǔ)充完全培養(yǎng)基至8ml，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
（3）細(xì)胞凍存
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，收集細(xì)胞懸液，1000rpm離心4min，棄去上清液，用PBS清洗一遍。
加入無血清凍存液，調(diào)整細(xì)胞密度至5×10?～1×10?/mL，輕輕混勻。
將細(xì)胞懸液分裝至凍存管中，每管1ml，做好標(biāo)記。
將凍存管放入-80℃冰箱預(yù)凍24h后，轉(zhuǎn)入液氮罐中長期儲(chǔ)存。
注意事項(xiàng)：
整個(gè)操作過程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范，避免細(xì)菌、真菌等微生物污染培養(yǎng)基和細(xì)胞。
運(yùn)輸用的灌液培養(yǎng)基不能再用于培養(yǎng)細(xì)胞，收到細(xì)胞后需更換為按照說明書新配制的完全培養(yǎng)基。
為保證細(xì)胞存活率，收到凍存細(xì)胞后請(qǐng)立即解凍復(fù)蘇，若無法立即操作，凍存細(xì)胞可在-80℃條件下保存1個(gè)月。
首次傳代建議采用1:2的傳代比例，后續(xù)可根據(jù)細(xì)胞生長情況調(diào)整傳代比例。
產(chǎn)品僅供科學(xué)研究使用，不可用于動(dòng)物或人類疾病的治療及臨床診斷。
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關(guān)鍵字： 小鼠角膜基質(zhì)細(xì)胞;永生化;細(xì)胞專用培養(yǎng)基;
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