Recombinant Human PF4

PF4傳統(tǒng)上被認(rèn)為是血小板α顆粒釋放的產(chǎn)物，能夠中和肝素的抗凝作用并趨化中性粒細(xì)胞27。然而，最新的突破性研究揭示了其作為“抗衰老因子”的全新角色：隨著年齡增長，體內(nèi)PF4水平下降，導(dǎo)致造血干細(xì)胞（HSC）功能衰退；外源性補(bǔ)充重組PF4蛋白可逆轉(zhuǎn)老年小鼠及人類造血干細(xì)胞的衰老表型，恢復(fù)免疫平衡38。此外，PF4還能通過外周作用改善衰老小鼠的認(rèn)知能力9。重組PF4蛋白是探索血液系統(tǒng)衰老機(jī)制、神經(jīng)免疫調(diào)節(jié)及開發(fā)相關(guān)治療策略的核心工具。

商品介紹：

別稱：C-X-C motif chemokine 4, Chemokine (C X C motif) ligand 4, Chemokine (CXC motif) ligand 4, chemokine ligand 4, CXCL 4, CXCL4, Iroplact, MGC138298, Oncostatin A, Oncostatin-A, OncostatinA, PF 4, PF-4, PF4, Pf4a, Platelet factor 4, PLF4_HUMAN, SCYB 4, SCYB4, short form, Small inducible cytokine subfamily B, Small inducible cytokine subfamily member 4

標(biāo)簽：N-terminal His Tag

種屬：Human

宿主：E.Coli

表達(dá)區(qū)間：31-101

分子量：7.7 kDa

                 Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses

應(yīng)用：Western Blot, ELISA

性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4

純度：Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses

溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex

存儲:-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution

檢測原理詳解：

包被抗體結(jié)合

實(shí)驗(yàn)開始前，微孔板已預(yù)先包被?抗人白脂素單克隆抗體。當(dāng)加入待測樣本后，樣本中的人白脂素（Asprosin）

會與固相載體上的捕獲抗體特異性結(jié)合。

形成“夾心復(fù)合物”

洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入?生物素標(biāo)記的檢測抗體，該抗體與白脂素分子的另一表位結(jié)合，形成“固相抗體

—抗原—檢測抗體”三明治結(jié)構(gòu)。

酶促顯色反應(yīng)

隨后加入?辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素檢測抗體結(jié)合。最后加入TMB顯色底物，在

HRP催化下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，反應(yīng)終止后變?yōu)辄S色。

濃度定量分析

黃色深淺與樣本中白脂素含量成正比，通過酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度（OD值），并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)

算出樣本中白脂素的濃度。

公司正在出售的產(chǎn)品：

1. 基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建

從人類FBN1基因C端序列中擴(kuò)增?Asprosin編碼片段（約140aa）。

將目的片段插入原核表達(dá)載體，確保帶有?N端或C端His標(biāo)簽，便于后續(xù)純化。

轉(zhuǎn)化至?感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽性克隆并測序驗(yàn)證。

2. 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)

取陽性菌落接種于LB培養(yǎng)基（含氨芐青霉素），37℃振蕩培養(yǎng)過夜。

次日按1:100比例轉(zhuǎn)接至新鮮LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至OD600達(dá)0.6–0.8。

加入?IPTG至終濃度0.1–1.0 mM?，?16–25℃誘導(dǎo)表達(dá)6–12小時(shí)（低溫誘導(dǎo)有助于可溶性表達(dá)）。

4℃、8000×g離心10分鐘收集菌體，棄上清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

3. 菌體裂解與蛋白提取

將菌體沉淀重懸于?裂解緩沖液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制劑），超聲破碎（冰浴條件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。

4℃、12000×g離心20分鐘，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵體蛋白）。

若為包涵體蛋白，需用?洗滌緩沖液（含2M尿素的PBS）洗滌2–3次，去除雜蛋白。

4. 親和層析純化（Ni-NTA法）

將含His標(biāo)簽的蛋白溶液（或溶解后的包涵體蛋白，使用含6–8M尿素的緩沖液溶解）上樣至?Ni-NTA親和層析柱。

用?洗滌緩沖液（含20–40mM咪唑）洗去非特異性結(jié)合蛋白。

用?洗脫緩沖液（含250–500mM咪唑）梯度洗脫目標(biāo)蛋白，收集洗脫峰。

透析去除尿素與咪唑（使用PBS或生理緩沖液，4℃過夜，更換3次）。

5. 蛋白復(fù)性（針對包涵體蛋白）

若蛋白以包涵體形式表達(dá)，需在純化后進(jìn)行?梯度復(fù)性：

將變性蛋白緩慢加入含?梯度降低尿素?（6M → 4M → 2M → 0M）的復(fù)性緩沖液中，4℃攪拌過夜。

或采用?透析法?逐步去除變性劑。

復(fù)性后再次離心取上清，檢測蛋白活性。