Recombinant Human UBE2W
Recombinant Human UBE2W（重組人泛素結(jié)合酶E2W）是一種在大腸桿菌中表達(dá)的高純度重組蛋白，作為E2泛素結(jié)合酶家族成員，它具有獨(dú)特的N端單泛素化活性，能識(shí)別無序N端結(jié)構(gòu)域并介導(dǎo)底物（如FANCD2、STUB1/CHIP）的單泛素化修飾，在DNA損傷修復(fù)、蛋白質(zhì)量控制及神經(jīng)退行性疾病機(jī)制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
商品介紹：
A-01K102122-50μg | Recombinant Human UBE2W |
A-01K102122-200ug | Recombinant Human UBE2W |
A-01K102122-1mg | Recombinant Human UBE2W |
別稱：FLJ11011, hUBC 16, hUBC16, Probable ubiquitin conjugating enzyme E2 W, Probable ubiquitin-conjugating enzyme E2 W, UBC 16, UBC-16, UBC16, UBE 2W, ube2w, UBE2W_HUMAN, Ubiquitin carrier protein W, Ubiquitin conjugating enzyme 16, Ubiquitin conjugating enzyme E2 W, Ubiquitin conjugating enzyme E2W, Ubiquitin protein ligase W, Ubiquitin-protein ligase W
標(biāo)簽：N-terminal His Tag
種屬：Human
宿主：E.Coli
表達(dá)區(qū)間：1-162
分子量：17.7 kDa
Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
應(yīng)用：Western Blot, ELISA
性狀：Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
純度：Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
溶解方法:Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存儲(chǔ):-20°C for 12 months as lyophilized; 2-8°C for 1 month under sterile conditions after reconstitution
檢測(cè)原理詳解：
包被抗體結(jié)合
實(shí)驗(yàn)開始前，微孔板已預(yù)先包被抗人白脂素單克隆抗體。當(dāng)加入待測(cè)樣本后，
樣本中的人白脂素（Asprosin）會(huì)與固相載體上的捕獲抗體特異性結(jié)合。
形成“夾心復(fù)合物”
洗滌去除未結(jié)合物質(zhì)后，加入生物素標(biāo)記的檢測(cè)抗體，該抗體與白脂素分子的另一表位結(jié)合，
形成“固相抗體—抗原—檢測(cè)抗體”三明治結(jié)構(gòu)。
酶促顯色反應(yīng)
隨后加入?辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的鏈霉親和素，與生物素檢測(cè)抗體結(jié)合。
最后加入TMB顯色底物，在HRP催化下產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物，反應(yīng)終止后變?yōu)辄S色。
濃度定量分析
黃色深淺與樣本中白脂素含量成正比，通過酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度（OD值），
并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣本中白脂素的濃度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白4 | HRP反應(yīng)終止緩沖液 |
FAM133B蛋白 | 載玻片細(xì)胞PARP蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡酶聯(lián)免疫試劑盒 |
魔芋葡甘露聚糖比色法定量pcr檢測(cè)試劑盒 | EGFR 蛋白免疫共沉淀分析試劑盒 |
P1噬菌體效價(jià)pcr檢測(cè)試劑盒 | 牛病毒性腹瀉病毒（Bovine Viral Diarrhoea Virus；BVDV） |
組織ERK1激酶活性定量pcr檢測(cè)試劑盒（A/B/C） | 鈉/葡萄糖協(xié)同轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2抗體 |
純化線粒體膜通道孔（MPTP）比色法pcr檢測(cè)試劑盒 | 毒蕈堿型乙酰膽堿受體M2抗體 |
細(xì)胞甲基化組蛋白H3-K4染色質(zhì)免疫沉淀分析（CHIP）試劑盒 | 石蠟切片神經(jīng)組織固藍(lán)（FAST BLUE）染色試劑盒 |
干擾素誘導(dǎo)的雙鏈RNA活化蛋白激酶 | 細(xì)胞SRCN2激酶活性定量pcr檢測(cè)試劑盒（A/B/C） |
轉(zhuǎn)錄中介因子Tif1α | 乙型肝炎病毒X蛋白 (HBX) 抗體 |
Cy5標(biāo)記的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體3 | Alexa Fluor? 700標(biāo)記人CD56 (NCAM)單克隆抗體 |
甲基化組蛋白H3 (tri methyl K36) 單克隆 | Recombinant Human UBE2W?磷酸化14-3-3 τ抗體 |
PE標(biāo)記小鼠CD152單克隆 | 細(xì)菌苯丙脫氨基檢測(cè)試劑盒 |
Recombinant Human GGCT | Recombinant Human B9D2 |
實(shí)驗(yàn)步驟：
1. 基因克隆與表達(dá)載體構(gòu)建
從人類FBN1基因C端序列中擴(kuò)增Asprosin編碼片段（約140aa）。
將目的片段插入原核表達(dá)載體，確保帶有?N端或C端His標(biāo)簽，便于后續(xù)純化。
轉(zhuǎn)化至?感受態(tài)細(xì)胞，篩選陽性克隆并測(cè)序驗(yàn)證。
2. 重組蛋白誘導(dǎo)表達(dá)
取陽性菌落接種于LB培養(yǎng)基（含氨芐青霉素），37℃振蕩培養(yǎng)過夜。
次日按1:100比例轉(zhuǎn)接至新鮮LB培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)至OD600達(dá)0.6–0.8。
加入IPTG至終濃度0.1–1.0 mM，16–25℃誘導(dǎo)表達(dá)6–12小時(shí)（低溫誘導(dǎo)有助于可溶性達(dá)）。
4℃、8000×g離心10分鐘收集菌體，棄上清，-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3. 菌體裂解與蛋白提取
將菌體沉淀重懸于裂解緩沖液（如PBS + 1% Triton X-100 + 蛋白酶抑制劑），超聲破碎
（冰浴條件下，每次30秒，共6–10次，功率30%）。
4℃、12000×g離心20分鐘，收集上清（可溶性蛋白）或沉淀（包涵體蛋白）。
若為包涵體蛋白，需用?洗滌緩沖液（含2M尿素的PBS）洗滌2–3次，去除雜蛋白。
4. 親和層析純化（Ni-NTA法）
將含His標(biāo)簽的蛋白溶液（或溶解后的包涵體蛋白，使用含6–8M尿素的緩沖液溶解）上樣至?Ni-NTA親和層析柱。
用?洗滌緩沖液（含20–40mM咪唑）洗去非特異性結(jié)合蛋白。
用?洗脫緩沖液（含250–500mM咪唑）梯度洗脫目標(biāo)蛋白，收集洗脫峰。
透析去除尿素與咪唑（使用PBS或生理緩沖液，4℃過夜，更換3次）。
5. 蛋白復(fù)性（針對(duì)包涵體蛋白）
若蛋白以包涵體形式表達(dá)，需在純化后進(jìn)行?梯度復(fù)性：
將變性蛋白緩慢加入含?梯度降低尿素（6M → 4M → 2M → 0M）的復(fù)性緩沖液中，4℃攪拌過夜。或采用?透析法?逐步去除變性劑。復(fù)性后再次離心取上清，檢測(cè)蛋白活性。
關(guān)鍵字： UBE2W;Human;E.Coli;
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