半纖維素（hemicellulose）含量試劑盒說明書

分光光度法50管/48樣

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

半纖維素是植物細(xì)胞壁中與纖維素緊密結(jié)合的多糖混合物，是構(gòu)成細(xì)胞初生壁的主要成分，廣泛存在

于植物中，是一種新型可利用能源。

測定原理：

半纖維素經(jīng)酸處理后轉(zhuǎn)化成還原糖，與DNS生成紅棕色物質(zhì)，在540nm有特征吸收峰，吸光值大反

映了半纖維素含量。

組成：

產(chǎn)品名稱GMS066-50T/48SStorage

試劑一：液體60mL4℃

試劑二：液體60mL4℃

試劑三：液體30mL4℃

試劑四：液體10mL4℃，避光

標(biāo)準(zhǔn)品：D-木糖10mg×1管4℃，避光

說明書一份

標(biāo)準(zhǔn)品（選做）：可將標(biāo)準(zhǔn)品用提取液稀釋至10mg/ml母液，用于標(biāo)準(zhǔn)曲線制作。

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版本2.0，最后更新于2026年3月25日

自備儀器和用品：

天平、40目篩，離心機(jī)，恒溫水浴鍋、烘箱、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿（1cm）、乙醇、

丙酮。

樣品處理

1、樣品80℃烘干至恒重，粉碎，過40目篩。稱取0.01g樣本，加入80%乙醇1mL，90℃水浴30min，

冷卻至室溫，8000g、25℃離心10min，棄上清留沉淀，80℃烘干。

2、在上述烘干的沉淀中加入1mL試劑一，充分混勻后，95℃水浴60min，取出冷卻后，8000g、25℃

離心10min，棄上清留沉淀，用蒸餾水清洗3次（加入1mL蒸餾水混勻即可），8000g、2℃離心10

min，棄上清留沉淀，再用丙酮清洗1次（加入1mL丙酮混勻即可），8000g、25℃離心10min，棄

上清留沉淀，80℃烘干。

3、在上述烘干的沉淀中加入1mL試劑二，95℃水浴30min，取出冷卻后，8000g、25℃離心10min。

取上清500μL，加入500μL試劑三，混勻后待用。

樣品制備注意事項(xiàng)：

1、80℃烘干的時(shí)間為2小時(shí)，依據(jù)樣本情況可延長烘干時(shí)間。

2、90℃或95℃加熱過程中EP管可能爆開，建議用膠帶封口或使用帶螺旋蓋的防爆EP管。

測定操作表：

試劑（μL）空白管測定管

上清（μL）240

蒸餾水（μL）240

試劑四（μL）180180

蒸餾水（μL）780780

充分混勻，90℃水浴5min，自然冷卻，25℃、8000g離心10min

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版本2.0，最后更新于2026年3月25日取1mL上清液于1mL玻璃比色皿，測定

△540nm處吸光值A(chǔ)。分別記為A空

白管和A測定管，A=A測定管-A空白管。空白管只要做一管。

計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為y=0.509x-0.06883，R2=0.9979；x為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y為吸

光值。半纖維素含量（mg/g干重）=[（

△A+0.06883）÷0.509]×V樣總÷W=3.929×（

△A+0.06883）÷W

W：樣品質(zhì)量，g；V樣總：加入提取液體積，2mL。

注意事項(xiàng)：

1.若ΔA大于0.8，需對(duì)樣本處理后的上清液進(jìn)行稀釋，最終計(jì)算結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)。

2.若ΔA值小于0.01，可增加樣本質(zhì)量W。

3.本法測定的線性范圍為0.25~5mg/mL，ΔA檢測下限為0.01；檢測上限為0.8。

4.提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線及公式僅供參考，若有需要，可用提供的標(biāo)準(zhǔn)品自制標(biāo)曲（計(jì)算公式及線性范圍

根據(jù)自制標(biāo)準(zhǔn)曲線需作對(duì)應(yīng)修改），但需要注意，受儀器及個(gè)人操作影響，客戶自制標(biāo)準(zhǔn)曲線可

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能與說明書中提供的標(biāo)準(zhǔn)曲線有差別。若無另外的實(shí)驗(yàn)要求，也可直接使用說明書所給標(biāo)曲進(jìn)行

計(jì)算。

5.為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

實(shí)驗(yàn)實(shí)例：

樣本為木聚糖（玉米芯來源，85%），樣本處理后的上清液稀釋20倍，重復(fù)三次實(shí)驗(yàn)。按測定步驟操作，

測得結(jié)果如下表，根據(jù)計(jì)算公式得：

樣本-1樣本-2樣本-3

△g）0.10090.10830.0603

W（

A1.0531.0450.508

半纖維素含量

873.67808.17751.70

（mg/g干重）

示例：樣本-1半纖維素含量（mg/g干重）=3.929×（1.053+0.06883）÷0.1009×20=873.67

常見問題及解決方案：

問題可能原因解決方法

樣品類型不合適參考說明書了解不兼容的樣品類型

組織樣品勻漿不充分延長超聲時(shí)間/增加勻漿器的研磨次數(shù)

樣品讀樣品反復(fù)凍融次數(shù)過多將樣品分裝，不可反復(fù)凍融

數(shù)重復(fù)樣品中含有干擾物質(zhì)排查干擾物質(zhì)，必要時(shí)對(duì)樣品進(jìn)行脫蛋白處理

性差樣品讀數(shù)超出線性范圍對(duì)樣品進(jìn)行濃縮或稀釋，使讀數(shù)處于線性范圍內(nèi)

氣泡會(huì)干擾讀數(shù)，操作時(shí)盡量避免產(chǎn)生氣泡，讀數(shù)前務(wù)

孔中有氣泡

必去除氣泡

樣品放置時(shí)間過長或儲(chǔ)存不當(dāng)使用新鮮制備的樣品，按推薦溫度保存至使用前

樣品和

試劑盒組分未完全解凍待組分完全解凍后輕輕混勻再使用

標(biāo)準(zhǔn)品

試劑在冰上放置時(shí)間過長每次使用前新鮮配制反應(yīng)混合液

讀數(shù)偏

孵育時(shí)間/溫度不當(dāng)參考說明書推薦的孵育時(shí)間和/或溫度

低/偏高

試劑加樣量錯(cuò)誤檢查移液槍是否校準(zhǔn)（始終使用能吸取整體積的最小量

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程移液槍）；盡量避免吸取過小體積的試劑

配制反應(yīng)混合液時(shí)移液誤差始終配制混合母液

參考文獻(xiàn)：

[1]RAFIQULISM,SAKINAHAMM,ZULARISAMAW.HydrolysisofLignocellulosicBiomassfor

RecoveringHemicellulose:StateoftheArt[M/OL]//WasteBiomassManagement–AHolisticApproach.

SpringerInternationalPublishing,2017:73-106.http://dx.doi.org/10.1007/978-3-319-49595-8_4.

DOI:10.1007/978-3-319-49595-8_4.

[2]DESHAVATHNN,MUKHERJEEG,GOUDVV,etal.Pitfallsinthe3,5-dinitrosalicylicacid(DNS)assay

forthereducingsugars:Interferenceoffurfuraland5-hydroxymethylfurfural[J].InternationalJournalof

BiologicalMacromolecules,2020,156:180-185.

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