基本信息?
產(chǎn)品名稱 | RAPA3G動(dòng)物組織直擴(kuò)PCR試劑盒 | 貨號(hào) | P-PR1271 |
規(guī)格 | 80T(50 μl 體系) | 用途 | 僅供科研 |
?英文名稱?：RAPA3G Direct PCR Kit for Animal Tissues
作用機(jī)制：優(yōu)化的PCR反應(yīng)體系，無需對(duì)動(dòng)物組織樣本進(jìn)行核酸提取，可直接裂解組織細(xì)胞釋放DNA，同時(shí)抑制樣本中的PCR抑制劑，實(shí)現(xiàn)對(duì)靶基因的擴(kuò)增，簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)操作步驟。
適用樣本：新鮮或凍存的動(dòng)物組織樣本，如鼠尾、鼠耳、肝臟、肌肉等，適用于基因分型、病原體檢測(cè)等快速PCR實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品概述
無需對(duì)動(dòng)物組織樣本進(jìn)行復(fù)雜的DNA提取純化，可直接以動(dòng)物組織裂解液為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增的專用試劑盒。試劑盒內(nèi)包含適配直接擴(kuò)增的RAPA3G熱啟動(dòng)DNA聚合酶、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液、組織裂解試劑等組分，能有效克服動(dòng)物組織中PCR抑制物的影響，實(shí)現(xiàn)從動(dòng)物組織到PCR擴(kuò)增的快速轉(zhuǎn)化，大幅縮短實(shí)驗(yàn)周期，適用于動(dòng)物基因分型、轉(zhuǎn)基因檢測(cè)、病原篩查等高通量樣本檢測(cè)場(chǎng)景。
產(chǎn)品特點(diǎn)
無需DNA提?。褐苯右詣?dòng)物組織裂解液為模板，省略復(fù)雜純化步驟
超強(qiáng)抗抑制能力：可耐受動(dòng)物組織中的血紅素、粘蛋白等強(qiáng)抑制成分
高效擴(kuò)增性能：集成RAPA3G熱啟動(dòng)聚合酶，擴(kuò)增成功率接近100%
高通量適配：優(yōu)化的反應(yīng)體系特別適合96/384孔板的自動(dòng)化檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
試劑與耗材檢查：確認(rèn)PCR預(yù)混液、上下游引物、模板DNA、無酶水等試劑在有效期內(nèi)，外觀無渾濁、沉淀；PCR管、槍頭需為無酶無菌規(guī)格。
儀器預(yù)熱：提前10-15分鐘啟動(dòng)PCR儀，設(shè)置好反應(yīng)程序，確保儀器達(dá)到預(yù)設(shè)溫度。
環(huán)境準(zhǔn)備：在超凈工作臺(tái)內(nèi)操作，佩戴無粉手套，避免交叉污染；操作前用75%酒精擦拭臺(tái)面和移液器。
反應(yīng)體系配制
冰上操作：將所有試劑放置于冰盒內(nèi)，避免酶失活。
體系配比（以25μL體系為例）：
PCR預(yù)混液（含Taq酶、dNTP、Buffer）：12.5μL
上游引物（10μM）：1μL
下游引物（10μM）：1μL
模板DNA：1-5μL（根據(jù)模板濃度調(diào)整）
無酶水：補(bǔ)足至25μL
輕柔混勻：用移液器輕輕吹吸混合液3-5次，避免產(chǎn)生氣泡；若有氣泡可短暫離心去除。
分裝體系：將配制好的反應(yīng)液分裝至PCR管中，每管25μL，蓋緊管蓋。
PCR儀上機(jī)反應(yīng)
程序設(shè)置：根據(jù)引物Tm值和實(shí)驗(yàn)需求設(shè)置三步法或兩步法程序：
預(yù)變性：95℃，3-5分鐘
循環(huán)階段：95℃變性30秒，55-65℃退火30秒，72℃延伸（根據(jù)片段長(zhǎng)度調(diào)整，1kb約1分鐘），循環(huán)25-35次
終延伸：72℃，5-10分鐘
保溫：4℃。
上機(jī)運(yùn)行：將PCR管放入PCR儀樣品槽，確保管蓋緊密貼合；啟動(dòng)程序，等待反應(yīng)完成。
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注意事項(xiàng)
無菌操作：所有試劑和耗材需高壓滅菌或無菌處理，避免外源DNA污染
溫度控制：酶、dNTP等試劑需-20℃儲(chǔ)存，避免反復(fù)凍融
體系優(yōu)化：根據(jù)引物Tm值、模板類型調(diào)整Mg2+濃度和退火溫度
對(duì)照設(shè)置：每次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置陰性對(duì)照（無模板）和陽性對(duì)照（已知陽性模板）
關(guān)鍵字： RAPA3G動(dòng)物組織直擴(kuò)PCR試劑盒;RAPA3G Direct PCR Ki;
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